SEÑALES IMPLICADAS EN TUMORIGÉNESIS AUMENTAN LOS NIVELES DE RAC3 POR ACCIÓN DIRECTA A NIVEL DE SU PROMOTOR

C V ALVARADO; S M MICENMACHER; P N FERNÁNDEZ LARROSA; M F RUBIO; M A RUIZ GRECCO; M A COSTAS

CABA - ARGENTINA

Jornada; VIII JORNADAS CIENTÍFICAS DE I. DE INVESTIGACIONES MÉDICAS A. LANARI; 2009

IDIM-CONICET

En trabajos ya publicados demostramos que el coactivador de receptores nucleares RAC3, es también coactivador del factor de transcripción NF-kB que regula la expresión de genes de respuesta inflamatoria y antiapoptóticos, además demostramos su rol protector de la apoptosis y participación en la regulación de proteínas del ciclo celular. Aunque sus niveles son limitantes en células normales, su sobre-expresión se asocia al desarrollo de tumores tanto hormono-dependientes y actualmente a otros independientes y en este sentido hemos demostrado que en la carcinogénesis renal podría estar involucrada la sobre-expresión de RAC3. También demostramos que la citoquina TNF-a y NF-kB modulaban positivamente la expresión proteica de RAC3 en células de riñón embrionario humano HEK293 (no tumorales y con bajos niveles del mismo). Nuestro objetivo fue analizar si esta vía u otras señales desreguladas en tumorigenesis como el supresor tumoral P53 o condiciones de hipoxia que anteceden a la angiogénesis podrían actuar directamente sobre el promotor del gen de RAC3 y su efecto modulador sobre el mismo, para ello se amplificó por PCR con sobre ADN genómico la región de 967pb contiendo el primer exon del gen y fue introducida en un plásmido de manera que regule la expresión del gen de luciferasa. La construcción fue introducida en células HEK293, sola o simultáneamente con vectores que expresan la proteína de distintos factores: NF-kB, Ikb-ss (represor que impide la activación de NF-kB) y p53; de esta manera medir la emisión de luz será un reflejo de la modulación en el promotor. Se observó un aumento de actividad luciferasa de un 300 +/-20% con NF-kB respecto de condiciones basales, que disminuyó un 200 +/-20% con Ikb-ss y un aumento de 50 +/-5%  al ser estimuladas con TNF-a por 24hs. Al expresar P53 se vió un aumento del 450+/-30%  mientras que en condiciones de hipoxia disminuyó la actividad luciferasa 50+/-2. De acuerdo con estos resultados, se puede concluir que las señales habitualmente involucradas en tumorigénesis pueden ser responsables directas del aumento en los niveles de expresión de RAC3.