Deleción de una alelo de arginina quinasa de Trypanosoma cruzi

BOUVIER, LEÓN ALBERTO; MIRANDA, MARIANA; CANEPA, GASPAR; PEREIRA, CLAUDIO

Buenos Aires, Argentina

Jornada; VI Jornadas científicas del instituto de investigaciones medicas Alfredo Lanari; 2008

UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES

INTRODUCCIÓN: A lo largo de su ciclo de vida, el protozoario causante del mal de Chagas Trypanosoma cruzi, se enfrenta a condiciones extracelulares muy diversas. Es capaz de proliferar tanto en el entorno intestinal de insectos hematófagos como en el espacio intracelular de organismos vertebrados. Adicionalmente posee un estadío en el cual se desenvuelve en el torrente sanguíneo. De esta manera responde al cambio de medio extracelular adaptando tanto su morfología, regulación genética y metabolismo. Este último queda determinado en parte por la disponibilidad de nutrientes en cada entorno. Sorprendentemente T. cruzi carece de sustancias de reserva de fuentes de carbono como lípidos o polisacáridos. Sin embargo miembros de nuestro laboratorio descubrieron la presencia de la enzima arginina quinasa responsable de la síntesis de fosfoarginina, una importante reserva de energía. Esta enzima cataliza la transferencia reversible del fosfato de alta energía del ATP a la arginina. Según resultados de nuestro grupo la arginina quinasa formaría parte de mecanismos de respuesta a estrés. Sin embargo aun no queda claro si se trata de un factor indispensable para la supervivencia de este organismo en algún punto de su ciclo de vida. OBJETIVOS: Determinar la esencialidad de la enzima arginina quinasa mediante el desarrollo y estudio de parásitos nulos para el gen que la codifica. MATERIALES Y MÉTODOS: Se emplearon parásitos del estadío epimastigote de la cepa de Trypanosoma cruzi CL Brenner. Para lograr el reemplazo alélico del gen de la arginina quinasa se desarrollo una construcción que consiste en un marcador de selección a geneticina que contiene a cada lado secuencias que flanquean a la región codificante de la arginina quinasa. Esta construcción fue transfectada y los parásitos fueron sometidos a selección con geneticina. La confirmación del reemplazo se realizo mediante reacciones de PCR. RESULTADOS Y DISCUSIÓN: Camino a la generación de parásitos nulos para arginina quinasa se pudo realizar el reemplazo de un alelo por un marcador de selección. En inmunofluorescencias se detecta a la arginina quinasa distribuida de manera difusa respecto a parásitos de tipo silvestre. En cuanto al fenotipo las células presentan una morfología alargada y se aprecia un elevado número de tripomastigotes.