El efecto hipertrófico y fibrótico de la AII involucra al sistema de la TRH en cultivo de fibroblastos: posible participación del receptor AT1

PERES DIAZ LUDMILA; MARIANO L. SCHUMAN; MARÍA S. LANDA; CARLOS J. PIROLA; SILVIA I. GARCÍA

San miguel de Tucuman

Congreso; XXII CONGRESO ARGENTINO DE HIPERTENSIÓN ARTERIAL; 2015

Sociedad Argentina de Hipertensión Arterial

El sistema de la TRH cardiaco participa en el desarrollo de hipertrofia cardiaca (HC) en SHR, y su inhibición la atenúa. Su sobreexpresión induce HC en la rata Wistar. La AII además de vasopresora, es proinflamatoria e induce hipertrofia y fibrosis cardíaca. Demostramos que la infusión de AII durante 7 y 14 días en el ratón C57 induce la expresión de TRH cardiaca y más aún evidenciamos que sus efectos hipertróficos y fibróticos requieren de un sistema de TRH activo. Tratando de dilucidar el tipo celular involucrado, y siendo el fibroblasto crucial en esta patología, nos preguntamos si en este tipo celular la AII podría inducir TRH y esta a su vez estimular los genes profibroticos, como hemos observado "in vivo" en tejido cardiaco. Así realizamos la estimulación de AII (1uM, 24 hs) en la línea celular NIH 3T3 (fibroblastos de ratón, n=7 por grupo) a los que previamente les inhibimos el sistema de TRH, mediante la transfeccion de un  siRNA especifico contra el precursor de TRH (siRNA-TRH), comparándolos con células con el sistema de TRH intacto (siRNA-Con). La transfección se realizó 36 hs previo al estimulo utilizando lipofectamina 2000. A las 24 hs post estímulo con AII, los cultivos fueron levantados y a partir del RNA total se cuantificó la expresión del mRNA de preTRH, colágeno III, colágeno I, TGF-B y BNP por PCR en tiempo real. A favor de nuestra hipótesis, observamos que la AII aumentó (p< 0.03) la expresión de TRH. Este aumento solo se evidenció en el grupo de AII+siRNA-Con con el sistema de TRH activo confirmando además que la maniobra del bloqueo fue efectiva. La acción de AII sólo indujo la expresión de colágeno III, TGF-B y BNP  en el grupo que presentó  aumento de TRH demostrando que en necesario el sistema de TRH en  los efectos de la AII. Decidimos estudiar si la inducción de TRH vía AII involucraba al receptor AT1 y para evaluarlo bloqueamos el receptor AT1 con un antagonista específico (losartan 10 uM) durante 3 hs antes del agregado de  AII en dosis de 1 y 10 uM durante 24 hs en medio libre de suero definiendo 6 grupos (n=7): 1=Agua, 2=AII 1uM, 3=AII 10 uM, 4=agua+losartan, 5=AII 1uM+lossartan, 6=AII10uM+losartan. La AII indujo como esperábamos un aumento de TGF-B (p<0.01), aumento que fue completamente bloqueado con el agregado de losartan (p< 0.01) evidenciando la efectividad del tratamiento y la de su bloqueante. Al evaluar la expresión de TRH observamos un marcado aumento en el grupo estimulado con AII 10 uM que se vió atenuado significativamente con el agregado previo de losartan. Nuestros resultados muestran que la AII requiere en gran parte del sistema de TRH para ejercer su acción fibrotica sugiriendo que la TRH podría actuar como mediador de  los efectos fibróticos de la AII inducidos a través de su receptor AT 1.