La TRH Induce la Expresion de TGFbeta y Colagenos I y III en la linea Celular de Fibroblastos NIH 3T3: Posible Mediadora del Efecto Fibrotico de AII

LUDMILA S PERES DIAZ; MAIA AISICOVICH; MARIA S LANDA; MARIANO L SCHUMAN; SILVIA I GARCÍA

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Anual científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

Con experimentos "in vivo" demostramos que TRH cardíaca (TRHc) participa de los procesos desencadenantes de la hipertrofia cardiaca como hipertrofia, apoptosis y marcadamente en la fibrosis (Schuman y col 2011;2014). Hipotetizamos que la TRH debía actuar directamente sobre los fibroblastos cardíacos. Estas células poseen receptores para el tripeptido y son responsables de la fibrosis a través de la expresión de colágenos y la consecuente expansión de la MEC. Como aproximación utilizamos la línea celular de fibroblastos de ratón NIH3T3. Luego de 24 hs sin suero, el cultivo se estimuló con TRH (1y 10 uM) durante 24 y 48 h, tiempo en los cuales un grupo de placas (n=8) se levantaron para extraer el RNA y cuantificar genes (TGFbeta, col I y III, MMP 9y3) por PCR en tiempo real (syber green como fluoróforo intercalante). En otro grupo de placas (n=4) se cuantificaron lasproteínas por inmunofluorescencia. También evaluamos el tamaño celular en las distintas condiciones. Observamos un aumento significativo de la expresión de TGFβ en ambas concentraciones de TRH a las 24 h (P<0.02) que se vio reflejado en una aumento de laproteína (p<0.03).En igual sentido colágeno I y III mostraron una aumento significativo (p< 0.01) en mRNA y proteína que concuerda con los resultados de TGFbeta. Así también observamos un aumento (p< 0.02) del área celular de los fibroblastos estimulados con TRH aambos tiempos. Decidimos estudiar si TRH es mediador del efecto fibrótico de AII que se sabe esta mediado principalmente por TGFbeta. Estimulamos los cultivos por 24h con AII 1uM con y sin bloqueo previo de TRH (lipofectamina+siRNA) y observamos que AII induce el aumento de TRH (p<0.04) y que su bloqueo atenúa el marcado aumento de TGFbeta y de la expresión de colágenos inducido por AII. Nuestros resultados muestran por primera vez que la TRH actúa sobre los fibroblastos estimulando la expansión de la MEC (TGFbeta,colágenos, etc.) y que su presencia es requerida para el efecto fibrótico de la AII.