Regulación de la expresión del gen de la TRH por agentes hipertroficos en cultivos de fibroblastos cardiacos de ratas neonatas.

SCHUMAN ML,; COPA V; LANDA MS; ALVAREZ A; PIROLA CJ; GARCIA SI

Mar del PLata

Congreso; XLXII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Describimos por primera vez la presencia de TRH y su receptor tipo I en miocitos y fibroblastos de ratas neonatas.. A partir de estudios que muestran a los fibroblastos cardiacos (FC), no solo como formadores de la matriz sino como capaces de transmitir estimulos directos a miocitos, analizamos si la estimulación por 24 y 72 hs con agentes hipertrofiantes, capaces de estimular la expresión de TRH en miocitos provocaban efectos a nivel de los FC. Realizamos cultivos de FC de neonatos de ratas macho Wistar, SHR y WKY estimulados con agentes hipertroficos (Fenilefrina (Phe) 1y 100 uM; Inositol 3P (100 nM)) (libre de suero – 24hs) y cuantificamos la expresión de TRH y ANP mediante RT-real time PCR a partir del RNA total. Los corazones fueron digeridos a 37°C en PBS y 0,1% de tripsina. Se realizó un gradiente de percoll para separar los FC  y resuspendidos en DMEM, 5% FCS, 5% HS.. La Phe provocó un aumento significativo de la expresión del gen de TRH de 4 veces vs el control solo a 100 uM a las 24 y a las 72 hs (p< 0,001) (Anova, tukey test), asimismo el IP3 provocó un aumento tiempo dependiente (C: 100%; IP3-24h: 200%; IP3-48h: 250%, p< 0,03, n= 3). Obtuvimos resultados similares en la expresión del gen de ANP bajo estas mismas condiciones y una correlación significativa con los niveles de la expresión del gen de TRH (r:0,48 p<0,04). Finalmente analizamos la expresión del gen de TRH bajo estos estimulos en FC de neonatos de SHR vs WKY. Sorprendentemente, en celulas de neonatos (donde aun no son evidentes las alteraciones a nivel cardiaco) encontramos un aumento significativo de casi el 70% de la expresión del gen de TRH en el cultivo de SHR en la condición basal respecto de la WKY. Se observó un aumento muy significativo de la expresión de TRH con Phe que fue dosis y tiempo dependiente solo en la cepa WKY, sugiriendo una incapacidad de los FC de SHR para responder a estos agentes. Demostramos por primera vez la regulación del gen de la TRH por agentes hipertrofiantes en FC de neonatos. La presencia y regulación específica de la TRH en FC plantea la posible participación de la TRH en la fisopatologia cardíaca ya que esta aumentada en los FC de las SHR presentando un comportamiento diferencial frente a las WKY aun a la edad neonata.