Caspasa 3 activa como marcador de apoptosis en plaquetas de trombocitopenia inmune primaria. Su relación con la activación plaquetaria

GLEMBOTSKY AC; GOETTE NP; LEV PR; GRODZIELSKI M; PIERDOMINICI MS; RIVEROS D; MOLINAS FC; HELLER PG; MARTA RF

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Hemostasia y Trombosis; 2014

Grupo Cooperativo de Hemostasia y Trombosis

En un estudio previo demostramos que las plaquetas circulantes de pacientes con trombocitopenia inmune primaria (PTI) expresan fosfatidilserina (PS) en la cara externa de la membrana y tienen alteración del potencial de membrana mitocondrial, ambos, marcadores de apoptosis. Teniendo en cuenta que estos eventos pueden ocurrir también durante la activación de plaquetas, en el presente trabajo decidimos ampliar el estudio evaluando la activación de caspasa 3, marcador específico de apoptosis, y la activación de plaquetas en pacientes con PTI. Para ello se estudiaron 12 pacientes adultos; recuento de plaquetas 38+/-20x109/L. Se evaluó la caspasa 3 activa mediante la utilización de un inhibidor de caspasas conjugado a un fluorocromo (FLICA) y detección por citometría de flujo. La activación plaquetaria se evaluó tanto en condiciones basales como luego de la estimulación con ADP 20 uM y TRAP 20 uM, mediante la unión de PAC-1-FITC a la glicoproteína (GP) IIb-IIIa activada, la detección de P-selectina en la membrana plasmática por unión de CD62P-FITC, y la internalización de GPIb-IX, todos por citometría de flujo. Se observó aumento de la caspasa 3 activa en las plaquetas en condiciones basales: pacientes 16.6+/-13.0% vs controles 5.0+/-2.1%, (p=0.006, Mann Whitney test), así como luego del agregado de 6uM de ionóforo de calcio (p=0.0375) demostrando un aumento de la sensibilidad a estímulos apoptóticos. Se observó una correlación inversa entre el recuento de plaquetas y el porcentaje de caspasa 3 activa en condiciones basales (r=0.599, p=0.0394). En relación con la activación plaquetaria, no se observaron diferencias respecto al grupo control en la unión de PAC-1 en condiciones basales (p=0.6), ni luego de la activación con ADP (p=0.28) ni TRAP (p=0.37). La expresión de P-selectina no solo no se observó aumentada, sino que hubo una disminución de la misma respecto al grupo control en condiciones basales (p=0.074) y por estimulación con TRAP (p=0.083) no alcanzando significación estadística. El grado de internalización de la GPIb-IX fue semejante en pacientes y controles en las pruebas realizadas con los dos agonistas (p=0.426 en ambos casos). La activación de caspasa 3 encontrada en este estudio, conjuntamente con la ausencia de activación plaquetaria en condiciones basales, demuestra que el aumento de la expresión de PS en la membrana y la alteración de la variación de potencial de membrana mitocondrial observados previamente están relacionados a la presencia de apoptosis de plaquetas en PTI. Este mecanismo sería uno de los factores contribuyentes a la trombocitopenia en este desorden auto-inmune.