LA TRH PARTICIPA DEL EFECTO HIPERTROFICO Y FIBROTICO INDUCIDO POR INFUSIÓN DE AII

PERES DIAZ, LUDMILA; SCHUMAN, MARIANO LUIS; LANDA, MARIA SILVINA; PIROLA, CARLOS JOSÉ; GARCIA, SILVIA INES

CABA

Jornada; XIII Jornadas Científicas del Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari; 2014

El sistema de la TRH cardiaco participa en el desarrollo de hipertrofia cardiaca (HC) en ratas SHR. Su inhibición impide el desarrollo de HC (Hypertension 2011) y su sobre expresión induce hipertrofia en la rata. Es conocido que la angiotensina II (AII) además de vasopresora es proinflamatoria e induce hipertrofia y fibrosis cardíaca. Hipotetizamos que TRH podría mediar los efectos cardíacos de la AII. Realizamos en ratones C57 adultos infusión continua de AII (bomba ip. 2 mg/kg/día) vs.fisiológica (SF) durante 7d, y evaluamos los daños en dos grupos, uno al que previamente se le inhibió el sistema de TRH a través de una inyección intracardíaca de un siRNA especifico contra el precursor de TRH (siRNA-TRH) vs uno con el sistema de TRH cardiaco intacto (siRNA-Con). Registramos diariamente el peso corporal, la PAS, y el consumo de agua. Al sacrificio, se extrajo el corazón y se midió T3 y T4. A partir del RNA total de ventrículo izquierdo (VI) se cuantificó la expresión del mRNA de preTRH, su receptor (r-TRH I), colágeno III, BMHC, BNP y TGF-B por PCR en tiempo real. AII aumentó (p< 0.05)  la PAS en ambos grupos evidenciando su efectividad y provocó  un aumento (p< 0.05) de la expresión de TRH sólo en el grupo AII+siRNA-Con, verificándose la inducción de TRH por AII y la efectividad del bloqueo del sistema mediante siRNA-TRH. No hubo cambios en el índice hipertrófico (peso corazón/peso corporal) probablemente debido a la corta duración del experimento; aún así a los 7d, la AII aumentó (p<0.05) la expresión de BNP, BMHC, colágeno III y TGF-B en el grupo AII+siRNA-Con, aumento que no se observó en el grupo con el sistema de la TRH cardiaco bloqueado, grupo que presentó una expresión de los marcadores de daño cardíaco similar a los animales con SF. Repetimos el mismo protocolo extendiendo el tiempo de infusión de AII (bomba ip. 2 mg/kg/dia) al doble (14 d), para evidenciar el aumento de hipertrofia a través del índice. Como era esperable, AII nuevamente indujo un aumento (p<0.05) de la PAS y a favor de nuestra hipótesis, encontramos un aumento del índice hipertrófico sólo en el grupo tratado con AII+siRNA-Con , mientras que los animales sometidos a la infusión de AII con el sistema de la TRH bloqueado mostraron un índice hipertrófico similar al grupo con SF (p<0.05) indicando que el bloqueo de TRH atenúa los efectos de la infusión de AII. A favor de este resultado observamos que  AII indujo un aumento (p<0.05) de la expresión del mRNA de BNP, colágeno III y TGFB  en el grupo AII+siRNA-Con, aumento que no se observó en el grupo AII+siRNA-TRH, grupo que presentó una expresión de los marcadores de daño cardiaco similar a los animales que recibieron SF demostrando que hace falta un sistema de la TRH intacto para el efecto hipertrófico y fibrótico de la AII. Teniendo en cuenta que el fibroblasto es crucial en esta patología, evaluamos la estimulación de AII (1uM, 24 hs) en fibroblastos NIH 3T3 privados de suero 24 hs y transfectados con siRNA-TRH o siRNA-Con (lipofectamina, Invitrogen). La AII indujo un aumento (p< 0.03) de la expresión de TRH solo en el grupo de AII+siRNA-Con, verificándose la efectividad del bloqueo de la transfección con siRNA-TRH y provocó un aumento en la expresión de ambos colágenos III/I  y de la expresión de TGF-B (mediador del efecto fibrotico de AII) solo en el grupo que presentó el aumento de la expresión de TRH mostrando la participación de TRH en la inducción de colágenos por vía de la AII. Nuestros resultados tanto "in vivo" como "in vitro", ponen de manifiesto  por primera vez, la participación de la TRH en los efectos hipertróficos y fibroticos de la AII.