LA SOBREEXPRESIÓN DE RAC3 ES UN FACTOR CLAVE PARA LA TRANSICIÓN EPITELIO MESENQUIMÁ- TICA INDUCIDA POR TNF

PANELO L.C.; RUBIO M F; FERNANDEZ LARROSA P N; COSTAS M A

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

RAC3 (coactivador de la familia p160) es un oncogén cuya sola sobreexpresión aumenta la capacidad proliferativa, resistencia a apoptosis e induce transición epitelio mesenquimática (TEM). Se ha reportado que TNF es capaz de inducir TEM a través del aumento en la actividad NF-kB en células tumorales de mama MCF7 que naturalmente sobreexpresan RAC3. Demostramos previamente que RAC3 es coactivador del factor de transcripción NF-kB y por tal motivo decidimos investigar si la sobreexpresión de RAC3 es necesaria para que TNF induzca TEM. Para ello clones de células no tumorales HEK293 obtenidos por transfección estable con el vector de expresión (RAC3) o el vector vacío (VV) fueron estimulados por 24hs en ausencia de SFB: Basal, TNF (10ng/ml), SZ (sulfazalacina 500mM inhibidor de NF-kB) o TNF+SZ. Luego se tomaron fotografías y se observó diferencias morfológicas cuando RAC3 esta sobreexpresado; además se cuantificó el número promedio de proyecciones citoplasmáticas, observándose un aumento del 200% con alto RAC3 con respecto al VV (Basal) e incrementándose a un 400% bajo el estímulo de TNF, efecto inhibido por SZ. Se analizó la actividad MMP por zimografía, a partir de medios condicionados, observándose un aumento del 300% con alto RAC3 respecto del VV (Basal) que se incrementa a un 558% bajo el estímulo de TNF, siendo revertido por Sz. Por Western Blot se observó un aumento del 100% en los niveles de Vimentina y disminución del 30% de E-cadherina con RAC3 sobreexpresado respecto del VV (Basal) y un aumento del 230% y disminución del 40% de las mismas bajo el estímulo de TNF, efectos que fueron bloqueados por SZ. Es de destacar que no se observó efecto de TNF sobre la actividad MMP y niveles de Vimentina y E-cadherina cuando RAC3 no está sobreexpresado. Estos resultados sugieren que la sobreexpresión de RAC3 es un componente clave para la TEM inducida por TNF.