La resistencia a vincristina en las células K562 está asociada a una disminución de la actividad NF-kB

ASSEF YANINA; RUBIO MARÍA FERNANDA; COLÓ GEORGINA P; DEL MÓNICO SILVANA; COSTAS MÓNICA A; KOTSIAS BASILIO A

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clinica; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Los mecanismos que conducen a la multidroga resistencia (MDR) son unas de las razones del fracaso de la quimioterapia y se asocian a la sobreexpresión de P-glicoproteína o P-gp en las células tumorales. Las drogas antineoplásicas promueven la activación del factor de transcripción NF-kB, aunque en algunos tipos celulares NF-kB actuaría como supresor de la expresión de P-gp. En el marco del estudio de la regulación de la expresión concertada de las proteínas CFTR y P-gp, en este trabajo utilizamos la línea celular leucémica humana K562 y su derivada resistente a vincristina (K-Vinc) para evaluar la relación entre NF-kB y el fenotipo MDR. Las células K-Vinc crecen en presencia de vincristina 100 nM, mientras que la viabilidad de las K562 disminuye un 80% en estas condiciones. En ensayos previos observamos por PCR semicuantitativa que la expresión de P-gp en K-Vinc es 15 ± 8 veces mayor que en K562. Confirmamos estos resultados por western blot donde se observó una banda a 170 kDa en K-Vinc correspondiente a P-gp, mientras que no fue detectada en K562. El transporte mediado por P-gp fue evaluado por citometría de flujo midiendo la acumulación de la sonda fluorescente Fluo-3. La intensidad de fluorescencia fue: 33 ± 2 y 11 ± 1 unidades arbitrarias, en K562 y K-Vinc, respectivamente (p<0.01, n=3). La actividad de NF-kB en extractos nucleares fue evaluada por EMSA. Ambos tipos celulares presentaron actividad constitutiva de NF-kB, siendo menor en K-Vinc (n=2) y determinamos por supershift que el complejo-kB está formado por las subunidades p50/p65. Los niveles totales de p65 no difieren en K562 y K-Vinc, siendo p65/tubulina: 1.0 ± 0.2 y 1.1 ± 0.7, respectivamente (p>0.5, n=3). Nuestros datos indican que la resistencia a vincristina en las células K562 está acompañada de una sobreexpresión y un aumento de la capacidad de transporte de P-gp. En adición, las células K-Vinc presentan una disminución de la translocación al núcleo del heterodímero p50/p65 del NF-kB.