Apoptosis de plaquetas en pacientes con trombocitopenia inmune

CONTRUFO G; GOETTE NP; GLEMBOTSKY AC; PIERDOMINICI MS; GARCÍA A; HELLER PG; MOLINAS FC; MARTA RF

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Hemostasia y Trombosis; 2012

Grupo CAHT

APOPTOSIS DE PLAQUETAS EN PACIENTES CON TROMBOCITOPENIA INMUNE Contrufo G1, Goette NP1, Glembotsky AC1, Pierdominici S2, García A3, Heller PG1, Molinas FC1, Marta RF1. 1Hematología Investigación, IDIM-CONICET, Instituto Lanari, UBA, C.A.B.A, Argentina. 2Servicio de Hematología, Hospital Ramos Mejía, C.A.B.A., Argentina 3Servicio de Citometría de Flujo, CEMIC, C.A.B.A, Argentina La etiología de la trombocitopenia inmune (PTI) es la destrucción plaquetaria periférica y la inhibición de la megacariopoyesis debidas principalmente a autoanticuerpos (autoAc). En los últimos años se descubrió que las plaquetas sufren apoptosis como un mecanismo fisiológico que regula su sobrevida normal. La hipótesis del presente trabajo es que el aumento de la apoptosis plaquetaria podría ser una causa contribuyente a la trombocitopenia en esta patología. Se estudiaron plaquetas de 14 pacientes con PTI (recuento plaquetario [RtoP] 6-85x109/L) y 14 controles normales, a través de: 1- La medición de la expresión de fosfatidilserina (PS) en la membrana plaquetaria por unión de anexinaV-FITC 2- Cambios en el potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) por incorporación del reactivo JC-1 (10 ug/ml) 3- Micropartículas plaquetarias 4- Nivel de plaquetas jóvenes por incorporación de naranja de tiazol (Plaquetas reticuladas: PR). Se evaluó la apoptosis en condiciones basales y por inducción con ionóforo de calcio (A23187). Las muestras se analizaron por citometría de flujo. La especificidad de los autoAc se determinó en plasma por ELISA. En condiciones basales, los pacientes tuvieron mayor cantidad (%) de plaquetas con expresión de PS (media±SD pacientes / controles / prueba T apareada: 18.07±17.09 / 4.92±2.86 / p=0.0133) y pérdida de ΔΨm (44.04±26.41 / 15.46±7.56 / p=0.0002), y mayor producción de micropartículas plaquetarias (9.73±10.83 / 1.31±1.16 / p=0.0325), evidenciando aumento de la apoptosis plaquetaria. Luego de la estimulación con A23187, no hubo diferencias en la expresión de PS entre pacientes y controles (38.17±24.69 / 26.71±31.55 / p=0.1417) pero sí en la pérdida de ΔΨm (55.22±24.82 / 40.82±28.33 / p=0.0023) y en la producción de micropartículas (11.27±9.96 / 1.75±1.21 / p=0.0138). De los 13 pacientes evaluados para autoAc, 4 tuvieron autoAc dirigidos contra la glicoproteína (GP) IIb-IIIa, 1 contra GPIb-IX y 2 contra GPIaIIa. La presencia de autoAc no determinó un comportamiento particular en cuanto a la apoptosis plaquetaria. Se observó correlación negativa entre el grado de apoptosis basal y el RtoP (correlación Spearman: PS vs RtoP p=0.0067, ΔΨm vs RtoP p=0.0159, micropartículas vs RtoP p=0.0128). Las PR estuvieron aumentadas en los pacientes (15.24±5.28 / 4.03±3.07 / p=0.0001, prueba T no apareada) y no correlacionaron con el RtoP ni con los parámetros de apoptosis. En conclusión, los pacientes con PTI tienen aumento de apoptosis de plaquetas y mayor sensibilidad plaquetaria a estímulos apoptóticos. Nuestros resultados sugieren que la apoptosis plaquetaria podría ser un factor contribuyente a la trombocitopenia en la PTI.