Contribución de los iones Na+, Cl- y K+ al potencial de membrana de ovocitos de Xenopus Laevis.

ALEJANDRA PALMA ; GABRIELA MARINO; LUCIANO GALIZIA; ADRIANA LOSAVIO; BASILIO KOTSIAS

Buenos Aires

Jornada; XI Jornadas Científicas del Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari; 2012

Comisión Organizadora Jornadas IDIM 2011

Investigamos la contribución de distintos iones al potencial de membrana (Vm) de ovocitos de Xenopus laevis. Para la obtención de los mismos se extrae un segmento del ovario de una hembra y se coloca en solución ND96; los ovocitos en estadio V-VI se separan en forma manual y las células foliculares que rodean a los mismos se remueven mediante incubación con colagenasa tipo IA durante una hora y ligero agitado con pipeta Pasteur. Los ovocitos se mantienen a 18 ºC. El Vm fue registrado con microelectrodos intracelulares, en presencia de distintas soluciones. Debido a la variación del Vm en los diferentes “pools” de ovocitos, los experimentos fueron realizados de manera tal que se compararan las condiciones control y test en el mismo grupo de ovocitos. Para analizar la influencia del Cl- sobre el Vm, los ovocitos fueron incubados en una solución con reemplazo de Cl- con gluconato o glutamato. Esto no modificó el Vm (Vm control: -57.4 ± 8.1 mV, Vm gluconato: -64.8 ± 8.3 mV, p=0.56, n=3; Vm control: -64.1 ± 2.3 mV, Vm glutamato: -71.8 ± 2.4 mV, p=0.23, n=3). Éstos resultados fueron confirmados utilizando inhibidores de canales de Cl- como el DPC y DIDS. Ningún cambio fue observado en presencia de DPC (Vm control: -49.9 ± 2.5 mV; Vm 100 µM DPC: -42.7 ± 9.2 mV, p=0.54; Vm 200 µM DPC: -44.4 ± 5.7 mV, p=0.48; Vm 500 µM DPC: -46.5 ± 3.6 mV, p=0.44; n=3). Similares resultados fueron obtenidos con 1 mM del inhibidor DIDS (Vm control: -54.7 ± 7.7 mV, Vm DIDS: -60.0 ± 10.2 mV, p=0.28, n=3). Para evaluar el aporte de los iones K+ y Na+ al Vm, éste se registró en diferentes concentraciones extracelulares de ambos iones. El aumento de K+ extracelular (mM) produjo la despolarización de los ovocitos (Vm control: -63.3 ± 6.2 mV; Vm 10K+: -52.7 ± 1.6 mV, p>0.05; Vm 25K+: -41.5 ± 1.2 mV; Vm 50K+: -31.0 ± 2.7 mV; Vm 96K+: -22.1 ± 1.5 mV; p