Mecanismos de transducción intracelulares que participan en la función moduladora de inosina sobre la liberación de acetilcolina en terminales nerviosas motoras de mamífero.

ALEJANDRO CINALLI; JUAN GUARRACINO; ADRIANA LOSAVIO

Buenos Aires

Jornada; XI Jornadas Científicas del Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari; 2012

Comisión Organizadora Jornadas IDIM 2011

En trabajos anteriores encontramos que en sinapsis neuromuscular de ratón la inosina (IN, 100 µM), metabolito de adenosina, reduce en forma significativa la liberación espontanea y evocada de ACh al activar receptores de adenosina A3. Las vías clásicas asociadas a los receptores A3 son la inhibición de la actividad de la adenilato-ciclasa a través del acople con la proteína Gi y la estimulación de la fosfolipasa C vía proteína Gq. Sin embargo, otras vías intracelulares han sido descriptas en relación a estos receptores. Nuestro objetivo fue investigar los mecanismos de transducción intracelular involucrados en la acción de IN sobre la secreción de ACh cuando los receptores A3 son activados. En diafragmas de ratones CF1 se estudió el efecto de IN sobre la frecuencia de potenciales de placa miniatura (MEPPs) y amplitud de potenciales de placa (EPPs) en presencia de antagonistas de diferentes vías de señalización. Los resultados demuestran que los receptores A3 están acoplados a proteína Gi/o, ya que NEM (desacopla proteína Gi/o del receptor) previno el efecto inhibitorio de IN (NEM 125.7  13.9 % con respecto a los valores controles, NEM + IN 123.8  6.6 %, n= 5). Cuando analizamos la vía intracelular asociada a la activación de estos receptores encontramos que el inhibidor de PKA H-89 no modificó el efecto de IN sobre la frecuencia de MEPPs (H-89 101.8  5.0 % respecto al control, H-89 + IN 67.9  5.0 %, p  0.05, n=4), mientras que el inhibidor de PKC queleritrina (QL) ocluyó su acción (QL 102.7  9.3 %, QL + IN 105.9  10.7 %, n=4). Además, el inhibidor de calmodulina (CaM) W-7 previno la modulación inducida por IN (W-7 97.8  1.7 %, W-7 + IN 97.6  7.5 %), no estando esta acción relacionada a la activación de CaMKII, desde que su inhibidor KN-62 no alteró el efecto de IN (KN-62 104.4  7.9 %, KN-62 + IN 68.0  4.9 %, p  0.05, n=4). Cuando estudiamos las vías intracelulares asociadas a la función moduladora de IN sobre la amplitud de los EPPs, encontramos que H-89 no modificó el efecto de IN (H-89 92.9  0.9 % respecto del control, H-89 + IN 63.4  2.4 %, p  0.05, n=4) pero si fue abolido por QL (QL 102.9  9.8 %, QL + IN 109.3  9.2 %, n=4). Por otro lado, W-7 ocluyó el efecto de IN (W-7 107.4  9.1 %, W-7 + IN 101.4  8.9 %, n=4), pero en este caso, la acción de calmodulina estaba asociada a la fosforilación provocada por CaMKII (KN-62 104.3  7.5 %, KN-62 + IN 110.6  9.8 %, n=6). Estos resultados permiten sugerir que, en terminales motoras de mamífero, los receptores A3 están acoplados a proteína Gi/o. La inibición presináptica de la liberación espontanea del neurotransmisor estaría relacionada a la activación de PKC y CaM, mientras que el efecto modulador sobre la secreción evocada de ACh estaría vinculada a PKC y CaMKII.