En busca de nuevas funciones de la ndpk1 de Trypanosoma cruzi

CLAUDIO PEREIRA; DIGIROLAMO F; MARTINEZ SAYE M; CAMARA MM; MIRANDA MR

CABA

Congreso; XXV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2012

Las nucleósido difosfato quinasas (NDPK) son enzimas que cumplen un importante rol en el balance intracelular de nucleótidos mediante la transferencia de fosfatos de alta energía entre nucleósidos trifosfato y difosfato. Además, están asociadas a numerosos procesos biológicos, razón por la cual son consideradas enzimas multifuncionales. Algunas NDPKs de organismos patógenos son secretadas y actúan como factor de virulencia. La TcNDPK1 es una NDPK del parásito Trypanosoma cruzi atractiva para su estudio puesto que resultados previos indican que se une a secuencias de ADN, tiene actividad nucleasa y participa en mecanismos de resistencia a drogas tripanocidas que generan daño al material genético. A su vez, si bien presenta una localización principalmente perinuclear cuando es fusionada a la proteína GFP y expresada en parásitos produce gránulos que podrían estar vinculados con la naturaleza hexamérica de la NDPK y la dimerización de la proteína reportera. En el presente trabajo profundizamos el estudio de la formación de dichos gránulos mediante la generación de mutantes y encontramos que mutaciones que afectan la actividad de la enzima (T93A y H117N) no alteran la formación de los gránulos mientras que una mutación que impide dimerizar a la GFP (A206K) si lo hace. Actualmente, estamos construyendo una mutante que desestabiliza la estructura cuaternaria de la NDPK y que nos permitirá comprender más sobre este fenómeno. Es probable que estos gránulos ocurran dentro de las células como parte del funcionamiento normal de la NDPK y que se magnifiquen debido a la fusión. Por otro lado, exploramos la posible secreción de la enzima y su posible rol como factor de virulencia. Encontramos que TcNDPK1 es secretada por epimastigotes de T. cruzi en condiciones normales de cultivo. Todos estos resultados sugieren que la TcNDPK1 es una enzima multifuncional que podría actuar a nivel nuclear, intervenir en la enfermedad de Chagas y en muchos otros procesos aún por investigar.