Efecto de la trombopoyetina en la apoptosis de plaquetas

CONTRUFO GERALDINE; HELLER PAULA G; COSTAS MÓNICA; RUBIO FERNANDA; GARCÍA ALEJANDRO; MOLINAS FELISA C; MARTA ROSANA F

Mar del Plata

Congreso; LVI Congreso Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

SAIC

Se ha descubierto que el fenómeno de apoptosis de las células ocurre también en las plaquetas. El objetivo del trabajo fue evaluar si la Trombopoyetina (Tpo), principal citoquina que protege de la muerte al linaje megacariocítico, tiene el mismo efecto sobre plaquetas. Para ello se evaluó por citometría de flujo la expresión de fosfatidilserina en la membrana plaquetaria (unión de Anexina V-FITC) (AV) y los cambios en el potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm, mediante el reactivo JC-1), así como los niveles de caspasa 3 y Bcl-xL por western-blot. Para la inducción de apoptosis las plaquetas normales se incubaron 2 min con ionóforo de calcio (A23187) o 1h con peróxido de hidrógeno (H2O2). Ambos inductores produjeron aumento de unión de AV y variación del ΔΨm en forma concentración dependiente. Se evaluó si la incubación previa con Tpo tenía efecto sobre la apoptosis de plaquetas normales inducida por A23187 (0.5μM). Para ello, las plaquetas se incubaron con 100 ng/ml de Tpo durante 1-2 hs a 37°C y se evaluó la unión de AV y variación del ΔΨm tanto en condiciones basales como luego de la inducción de apoptosis. La Tpo tuvo un efecto protector ante el estímulo apoptótico (AV: p=0.0025; ΔΨm: p=0.0145; Rangos señalados de Wilcoxon, n=11). Se observó el mismo efecto en las plaquetas no estimuladas con A23187 aunque éste no alcanzó diferencias estadísticas. En las muestras estimuladas con A23187 se observó la disminución de las bandas de caspasa 3 y Bcl-xL. Sin embargo, la presencia de Tpo previa al estímulo apoptótico, en las condiciones ensayadas no modificó estos resultados. Se realizó una curva de concentración de Tpo entre 0 y 100 ng/ml que evidenció que el efecto protector es concentración dependiente (AV: p=0.0007, ΔΨm: p=0.0022; Correlación de Pearson, n=3). En conclusión, la Tpo fue capaz de proteger a las plaquetas frente a un estímulo apoptótico. Resta investigar la participación de otras moléculas como posibles blancos de la acción antiapoptótica de la Tpo.