IDIM   12530
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MEDICAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTUDIO DE LA MODULACIÓN DE TRANS-SPLICING MEDIADA POR UN APTÁMERO PARA TETRACICLINA
Autor/es:
LEÓN A. BOUVIER, MARÍA DE LOS MILAGROS CÁMARA, MARIANA R. MIRANDA Y CLAUDIO A. PEREIRA.
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011
Institución organizadora:
sociedad argentina de protozoologia
Resumen:
La transcripción en los organismos tripanosomátidos es de naturaleza policistrónica y la expresión de las secuencias codificantes que forman parte del transcripto primario depende de la reacción de trans-splicing. En esta se adiciona el fragmento “SL” que aporta la estructura CAP al 5􀀀 de la secuencia codificante localizada río abajo y se poliadenila el 3􀀀 de la secuencia codificante situada río arriba, determinando así la maduración de los mensajeros. Numerosos componentes de la maquinaria encargada se encuentran conservados con la responsable del cis-splicing en otros organismos eucariotas. En levaduras fue posible modular la reacción de splicing mediante la adición de un ligando específico para un aptámero estratégicamente ubicado próximo al sitio de splicing 5􀀀. Estos motivos de ARN seleccionados de forma artificial por su capacidad de unión a moléculas complejas, en presencia de las mismas rigidizan su estructura e interferirían de manera estérica con el reconocimiento de señales esenciales para las reacciones de splicing. En este trabajo se construyó un vector integrativo basado en el pTREX (Vazquez y Levin, 1999) con una secuencia intergénica HX1 modificada por inserción de un aptámero para tetraciclina próximo al sitio aceptor del fragmento SL. Se estudió la capacidad de la tetraciclina para modular la expresión de la proteína verde fluorescente, utilizada como gen reportero, en epimastigotes de Trypanosoma cruzi transgénicos para esta construcción. Se observa una correlación entre la concentración de tetraciclina en el cultivo y la disminución en los niveles de expresión de la proteína verde fluorescente. El refinamiento de construcciones basadas en aptámeros ofrece la posibilidad de desarrollar herramientas de manipulación genética con las cuales modular la expresión de genes de interés. A su vez estos motivos de ARN constituyen novedosos elementos para el estudio de los mecanismos de transsplicing en organismos kinetoplástidos.