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Introducción: Las adenilato quinasas (Adk) y las nucleósido difosfato quinasas (NdPk) son enzimas ampliamente distribuidas en los seres vivos. Las mismas son fosfotransferasas que catalizan la transferencia de fosfatos de alta energía entre los nucleótidos de adenosina manteniendo la homeostasis intracelular de los mismos y duplicando el potencial energético del ATP. Usualmente a estas enzimas se las encuentra asociadas a estructuras subcelulares dedicadas a la síntesis como al consumo de ATP. Entre estas últimas podemos destacar a los flagelos de cuya movilidad depende la supervivencia y viabilidad de numerosos organismos tanto de vida libre como parásitos incluyendo a T. cruzi. En tripanosomátidos se han encontrado siete isoformas de adenilato quinasa (TzAdk1-6 y N) y cuatro de nucleósido difosfato quinasa (TzNdPk1-4). Esto se podría explicar debido a la gran diversidad de condiciones que atraviesan durante su ciclo de vida. En el presente trabajo caracterizamos las fosfotransferasas flagelares TzAdk4 y TzNdPk3 de T. cruzi. Objetivos: Comenzar a estudiar las fosfotransferasas especificas de flagelo en T. cruzi Metodología: Epimastigotes (estadio replicativo no infectivo) de Trypanosoma cruzi de la cepa CL Brener, salvajes o modificados genéticamente, se cultivan a 28°C en medio LIT (triptosa de infusión de hígado). Para la localización subcelular de TcAdK3 por inmunofluorescencia, los parásitos se fijan y permeabilizan para luego incubarlos con el anticuerpo especifico y finalmente con anticuerpo secundario asociado a fluoróforos. Como marcadores de localización se utilizarán, colorante DAPI (nuclear) y PAR-2 (proteína estructural de la barra paraflagelar). Para la sobre-expresión de las proteínas de interés, se construirán modelos de parásitos transgénicos a partir de epimastigotes salvajes. Los parásitos se transfectarán mediante las técnicas clásicas, utilizando plásmidos completamente diseñados en nuestro laboratorio. Resultados y Conclusiones: TzAdk4 y TzNdPk3 fueron clonadas y sobre-expresadas en bacterias purificándose la proteína obtenida. Mediante ensayos bioquímicos de actividad enzimática, se pudo validar a las mismas como adenilato quinasas y nucleósido difosfato quinasas respectivamente. Con el objetivo de confirmar su localización subcelular se diseñaron plásmidos capaces de sobre expresar las distintas isoformas fusionadas a la proteína verde fluorescente. Una vez obtenido los parásitos transgénicos se pudieron observar patrones solubles como flagelares para ambas proteínas. Actualmente se están mapeando las señales responsables de las diferentes localizaciones como estudios funcionales de las mismas.