Un inhibidor de la metilacion del canal ENaC afecta la capacidad migratoria de celulas BeWo de trofoblasto humano.

MARINO G.; ASSEF Y.; KOTSIAS BA.

Mar del Plata

Congreso; LV Congreso Anual de SAIC; 2010

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

La linea celular BeWo deriva del trofoblasto humano y es utilizada para la investigacion del transporte ionico placentario. Hemos demostrado con tecnicas electrofisiologicas y de biologia molecular que el Canal Epitelial de Sodio sensible al amiloride (ENaC) se expresa en estas celulas y es funcional, participando en la migracion de estas celulas estimuladas con aldosterona y bloqueada con amiloride. La aldosterona activa en forma rapida al ENaC por medio de la metilacion de la subunidad b mientras que la 3-deaza-adenosina (DZA) activa inhibiendo esta reaccion. Nuestro objetivo es determinar si la metilacion del ENaC esta involucrada en el proceso de migracion celular en celulas BeWo. Evaluamos la capacidad migratoria celular utilizando el modelo de relleno de la herida (wound healing) en monocapas de celulas BeWo, midiendo el porcentaje cicatrizado a las 6h. Las celulas BeWo estimuladas con aldosterona (100 nM, 12 h) y con aldosterona + AMPc (100 uM, 30 min) cubren una mayor superficie de las heridas (25.3+/-4.5 y 33.3+/-1.4%) con respecto a las cultivadas sin estimulo hormonal (12.8+/-3.0%) o expuestas solo a AMPc (10.6+/-3.8%)(p<0.05, n=12). Observamos un efecto inhibitorio sobre la cicatrizacion de la herida, concentracion  dependiente de DZA en celulas tratadas con AMPc+aldosterona: 33.3+/-1.4, 26.7+/-2.2, 14.7+/-3.2, 11.0+/-1.8 y 5.1+/-0.1%, para concentraciones de DZA de 0, 50, 100, 200 y 300 uM (n=12). Hemos verificado mediante el ensayo de MTT que el aumento de la velocidad de cicatrizacion de la herida depende de la migracion y no de la proliferacion celular, descartando que este proceso pudiese enmascarar la migracion. La expresion proteica del ENaC estudiada por medio de Western blot no se modifica con DZA. Nuestros resultados indican que los efectos de la aldosterona sobre la migracin celular podran ser explicados en base a su efecto sobre la metilacion del ENaC.