Importante inhibición directa de trombina mediada por um arabinano de algas verdes

PAULA VIRGINIA FERNÁNDEZ; CIANCIA, MARINA; JOSE ESTEVEZ; LAERCIO POL FACHIN; HUGO VERLI; IRENE QUINTANA

Montevideo

Congreso; XXII Congreso Internacional Del Grupo Latinoamericano de Hemostasia y Trombosis; 2011

Grupo Latinoamericano de Hemostasia y Trombosis

IMPORTANTE INHIBICIÓN DIRECTA DE TROMBINA,  MEDIADA POR UN ARABINANO DE ALGAS VERDES   Fernández PV1, Ciancia M1,2,Estevez  J3, Pol-Fachin L4, Verli H4, Caramelo J5, Quintana I6 1Cát. Química de Biomoléculas-Dpto. Biología Aplicada y Alimentos –FAUBA (BsAs), 2 CIHIDECAR, CONICET-Dpto. Qca. Orgánica-FCEN-UBA (BsAs).  3Dpto. de Fisiología, Biología Molecular y Celular-FCEN-UBA- (Bs As). 4Programa de Pos-Graduação em Biologia Celular e Molecular-Centro de Biotecnologia-Faculdade de Farmácia-Univ. Federal do Rio Grande do Sul-Brasil. 5IIBBA, CONICET-(Bs As).6Lab.de Hemostasia y Trombosis-Dpto. de Química Biológica-FCEN-UBA- Bs As-Argentina. Correo electrónico: vfernand@agro.uba.ar   Investigaciones previas en polisacáridos de Codium vermilara nos permitieron identificar a un arabinano (Ab)  persulfatado, con importante acción inhibitoria directa sobre la trombina (T). El objetivo de este trabajo fue profundizar los conocimientos sobre este mecanismo de acción anticoagulante. METODOLOGÍA: Se determinaron el Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada (APTT) y el Tiempo de Trombina (TT) en plasma humano citratado incubado con soluciones de arabinanos (5µg/ml), con diferentes grados de sulfatación (Ab1>Ab2>Ab3). Se realizaron ensayos amidolíticos, en ausencia de inhibidores fisiológicos, con trombina humana (TH) y bovina (TB). La interacción entre T y Ab se evaluó por simulación dinámica molecular (SDM), dicroísmo circular (DC) y espectroscopía de fluorescencia (EF). RESULTADOS Y DISCUSIÓN: Ab1 es el arabinano más activo (APTTensayo/APTTcontrol= 2,6; TTensayo/TTcontrol  >10). Teniendo en cuenta que Ab2 tiene menor grado de sulfatación y que está sulfatado principalmente en C-4, la menor actividad de este polisacárido muestra la importancia de la cantidad de grupos sulfato y posición de los mismos en el esqueleto hidrocarbonado. Además, la acción inhibitoria de Ab1 resultó mayor sobre TB que sobre TH. SDM: Cuando Ab1 se une al exositio 2 de la trombina induce importante cambio conformacional en el sitio catalítico de la enzima. El grupo sulfato en C-2 parece interactuar más fuertemente con T, lo que confirma los resultados experimentales. La energía de interacción entre TB-Ab1 es significativamente mayor (-1017±103 kJ/mol) que entre TH-Ab1 (-756±95 kJ/mol). DC (en el UV lejano): Ab1 induce un cambio conformacional en la trombina. EF: Existe una unión cooperativa entre T y Ab1, con Kd = 5,5mM. CONCLUSIÓN: Ab1 mostró importante inhibición directa de T. Este efecto depende del grado de sulfatación del polisacárido y la posición de sustitución de los grupos sulfato. Ab1 induce mayor alteración en la tríada catalítica de la TB que en la de TH, explicando la diferencia en su efecto anticoagulante. Ab1 modula la actividad de T a través de la interacción con el exositio 2 de la enzima.