INQUIMAE   12526
INSTITUTO DE QUIMICA, FISICA DE LOS MATERIALES, MEDIOAMBIENTE Y ENERGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Discriminación de HNO y NO por apomioglobina reconstituida con MnIII protoporfirina IX
Autor/es:
BORON, IGNACIO; SUAREZ, SEBASTIAN; MARTÍ, MARCELO; DOCTOROVICH, FABIO; BARI, SARA E.
Lugar:
Tandil, Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; XV Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2007
Institución organizadora:
A
Resumen:
El estudio de la especie nitroxilo ha adquirido importancia en la última década al conocerse que es biosintetizado por óxido nítrico sintasas, que puede coexistir con el NO en el medio biológico y que es capaz de mediar efectos bioquímicos diferentes de los del NO.[1] En nuestro laboratorio, hemos demostrado anteriormente que porfirinas de MnIII solubles en agua son capaces de discriminar la presencia de óxido nítrico (NO) de su forma reducida, el nitroxilo (HNO/NO-), ya que reaccionan selectivamente con este último, provocando un corrimiento de la característica e intensa banda de Soret de más de 30 nm. [2]Con el propósito de desarrollar un método que permita cuantificar niveles de HNO en medios biológicos, nos propusimos incorporar una MnIII porfirina en una matriz proteica y evaluar su capacidad de discriminación de HNO y NO. Para ello, realizamos la reconstitución de apomioglobina con MnIII protoporfirina (MbMnIII) [3] y evaluamos su reactividad frente a dadores de la especie nitroxilo (trioxodinitrato de sodio, sal de Angeli) y de óxido nítrico (DEA/NO). Es importante destacar que estos dos dadores presentan cinéticas de descomposición comparables en las condiciones del ensayo. [4]La MbMnIII (λ1= 377nm, ε377 nm= 75000, λ2(Soret)= 471 nm) reacciona con trioxodinitrato formando MbMnIINO (λmax= 428 nm, ε428 nm aprox. 150000), mientras que no se evidencia reacción en presencia del dador de NO. Se realiza un seguimiento de la desaparición de la λ1 de MbMnIII (λ 377 􀃆 λ 428), y se determina la constante de afinidad por HNO, kon= 4,25 x 105 M-1s-1. La diferencia de absorbancia entre la proteína de partida y de llegada (Δλ = 51nm) permitiría realizar en forma directa la cuantificación de la desaparición de reactivo o la aparición de producto, siendo esta última la opción de mayor sensibilidad. La reconstitución, además de brindar un atrapante compatible con el medio biológico, permite estabilizar al producto de reacción MnIINO frente al oxígeno.
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