INQUIMAE   12526
INSTITUTO DE QUIMICA, FISICA DE LOS MATERIALES, MEDIOAMBIENTE Y ENERGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
INTERACCIÓN CARDIOLIPINA-CITOCROMO: DETERMINANTES DE ESTRUCTURA Y FUNCIÓN PROTEICA
Autor/es:
DAIANA CAPDEVILA; MARIA ANA CASTRO; VERONICA DEMICHELI; VERÓNICA TÓRTORA; RAFAEL RADI; DANIEL H. MURGIDA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XVIII Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2013
Resumen:
El citocromo c (Cyt) es una hemo-proteína soluble multi-funcional, que se comporta como transportador electrónico mitocondrial en la cadena respiratoria y como enzima peroxidasa en la activación de la apoptosis o muerte celular programada. En su llamada estructura nativa, es decir, la que interviene en el transporte de electrones, Cyt tiene las 6 posiciones de coordinación del hierro hémico ocupadas siendo His18 y Met80 los ligandos axiales. La unión de Cyt a los dominios de cardiolipina (CL) en la membrana son determinantes para el switch funcional de Cyt. Si bien aún no se conoce con exactitud el cambio estructural que esta unión estaría promoviendo, se sostiene que se rompe la unión Fe-Met80. Las interacciones de CL con Cyt estarían asociadas a la redistribución que sufre la CL durante la apoptosis. En este trabajo, se identificaron las conformaciones de Cyt estables en presencia de cardiolipina mediante experimentos Raman resonante. Se obtuvo la constante de afinidad de Cyt por CL (7.103M-1). Medidas del complejo CL-Cyt para la mutante de Cyt H33N/H26N indican que el complejo en este caso sería de alto spin, a diferencia de Cyt silvestre donde CL-Cyt es de bajo spin. A partir de este resultado y de la asignación espectral se puede afirmar los residuos H33/H26 estarían involucrados en la coordinación del Fe para el complejo CL-Cyt silvestre. Se realizaron experimentos tanto utilizando CL en solución como liposomas unilamelares (80 nm de diametro). Los resultados indican que la interacción sería distinta ya que la unión con CL en solución no presenta cooperatividad (n=1), mientras que con los liposomas sí. Se estudió el efecto de modificaciones químicas fisiológicamente relevantes, como la nitración, en el equilibrio conformacional de Cyt. Las medidas Raman resonante de Cyt nitrados permiten afirmar que la reactividad frente a CL de la especie nitrada en la posición 74 es 3 veces mayor. Se evaluó la correlación entre la presencia de conformaciones no nativas y la actividad peroxidasa. Se realizaron medidas de actividad peroxidasa mediante la zonda amplex Red en función de la relación CL:Cyt. La actividad de Cyt aumenta hasta 10 veces en presencia de CL. Estos resultados permiten afirmar que en el complejo CL-Cyt el Fe tiene una coordinación axial doble histidina y esta forma sería la responsable de la actividad peroxidasa que incorpora el Cyt en esta interacción. Además, la nitración facilita esta transición