Venciendo los limites prácticos para la aplicación ultra-rápida de agonista. Tecnología novedosa para el estudio de canales ionicos activados por ligando.

AUZMENDI, JERÓNIMO; FERNÁNDEZ DO PORTO, DARÍO; MOFFATT, LUCIANO

Buenos Aires

Congreso; XL SAB 2011; 2011

La determinación de los mecanismos cinético-moleculares de los canales iónicos activados por ligando depende de la capacidad de aplicar agonista a preparaciones de outside-out patch clamp. Por lo tanto, para asegurarse aplicaciones ultra-rápidas (20μs) que pueden resolver los estados de activación parcial, es necesario minimizar las variables prácticas que limitan la resolución temporal en la aplicación de agonistas1. El sistema intercambiador de solución es controlado por un piezoeléctrico que mueve la interfaz entre dos soluciones sobre la pipeta de patch. Vibraciones mecánicas causadas por el aumento de la velocidad del movimiento del piezo resulta en aplicaciones espurias de agonista2. En este estudio, se aplica un método de optimización basado en las transformadas de Fourier que nos ha permitido amortiguar las oscilaciones y obtener una función de transferencia entre el voltaje aplicado y el movimiento de la interfase. Además, con el fin de establecer cuáles son las condiciones que maximizan la probabilidad de encontrar los pulsos, estudiamos otras variables como la distancia entre las pipetas, la velocidad del flujo que baña la pipeta de patch y ancho del septum de la pipeta de aplicación y el espesor de la interface. Así, obtuvimos pulsos con un t50 de 26,3 ± 1.08μs (n=150) cuando el comando inicial fue un pulso cuadrado de 20μs. Además, se evaluó el rendimiento de pulso y se encontró 92,54 ± 1,31% (n=150) cruce a través de la interfaz. De esta manera, se demuestra que es posible resolver la limitación más importante para la ultra rápida las aplicaciones de los agonistas y por lo tanto tenemos una nueva herramienta para el análisis de los datos de la cinética.