INBA   12521
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN BIOCIENCIAS AGRICOLAS Y AMBIENTALES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA DE UN MUTANTE DE Burkholderia ambifaria T16 EN LA VÍA DEL 2-METIL CITRATO
Autor/es:
VINACOUR MATIAS; NIKEL PABLO; KRONBERG FLORENCIA; RUIZ JIMENA; MUÑARRIZ ELIANA
Lugar:
Ciudad Autonoma de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIV Congreso Argentino de Microbiología General - SAMIGE 2019; 2019
Institución organizadora:
SAMIGE
Resumen:
El propionato es uno de los ácidos grasos de cadena corta más abundante en las células. Asimismo, también se generan grandes cantidades de propionil-CoA como resultado de la β-oxidación de ácidos grasos de cadena impar, del catabolismo de ácidos grasos ramificados y de la degradación de aminoácidos ramificados. Considerando que el propionato y sus catabolitos derivados son letalmente tóxicos para las células, resulta fundamental el rol de las vías metabólicas involucradas en su detoxificación. La vía del 2-metil citrato (2-MC) es la ruta metabólica principal involucrada en el catabolismo y detoxificación del propionato en bacterias y hongos. Sin embargo, además de este rol, también se ha encontrado que el funcionamiento de esta vía metabólica resulta fundamental para la virulencia y capacidad antagonista en micobacterias y hongos filamentosos, respectivamente. {Burkholderia ambifaria T16} es una cepa bacteriana aislada de la rizósfera de cebada en la localidad de Junín (Pcia. de Buenos Aires). Esta bacteria posee características muy interesantes entre las cuales se incluyen su potente actividad funguicida y nematicida. Con el fin de evaluar si el funcionamiento de la vía del 2-MC afectaba dichas actividades se construyó una cepa mutante en la cual se eliminó, mediante una deleción precisa el gen {prpB} que codifica para la enzima metil isocitrato liasa, la cual cataliza el último paso de la vía del 2-MC. Para la construcción de esta mutante y teniendo en cuenta que {B. ambifaria T16} es resistente a la mayoría de los antibióticos convencionales, fue necesario construir un plásmido incapaz de replicar en {Burkholderia} que portara la resistencia al antibiótico trimetropima (Tmp). Para ello, se utilizaron los módulos de los plásmidos pSEVA ({S}tandard {E}uropean {V}ector {A}rchitecture) a los cuales se les adicionaron los genes que confieren la resistencia a Tmp. El nuevo plásmido se denominó pSEVA712S.Se comparó la actividad hemolítica en Agar Sangre, el antagonismo in vitro frente al hongo fitopatógeno {Fusarium oxysporum} y el índice de virulencia contra el nemátodo {C aenorhabditis. elegans} entre la cepa salvaje y la mutante. Los resultados mostraron que la eliminación del gen {prpB} afectó negativamente todas las características analizadas. Teniendo en cuenta que todos los parámetros evaluados responden al sistema de {Quorum sensing}, se decidió examinar la producción de acilhomoserinlactonas de cadena corta (AHLscc) en la cepa salvaje y en la mutante, utilizando para ello a la cepa biosensora {Cromobacterium violaceum} que produce violasceína en presencia de AHLscc. Los resultados mostraron que en la mutante {ΔprpB} prácticamente no se detectó producción de violasceína, mientras que si se detectó en la cepa salvaje. De acuerdo con estos resultados, podemos concluir que la inactivación de la vía del 2-MC afecta negativamente la producción de AHLscc en {B. ambifaria T16}, disminuyendo también dramáticamente su capacidad antagonista frente a hongos y nematodos.