INBA   12521
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN BIOCIENCIAS AGRICOLAS Y AMBIENTALES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Diseño de inoculantes de Bacillus amyloliquefaciens BNM122 para control de fitopatogenos
Autor/es:
SACCO, NATALIA; SYDORENKO, OKSANA; SORIA, MARCELO; CORREA, OLGA; KERBER, NORMA; PUCHEU, NORMA; GARCIA, AUGUSTO
Lugar:
Universidad Nacional de Quilmes
Reunión:
Congreso; Tercer Congreso Argentino de Microbiologia General; 2006
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Microbiologia General (SAMIGE)
Resumen:
Bacillus amyloliquefaciens BNM122 es una cepa capaz de controlar varios hongos fitopatógenos. Las especies biocontroladoras de Bacillus cuentan con distintos mecanismos de actividad antifúngica. En B. amyloliquefaciens BNM122 se demostró excreción de compuestos extracelulares, como iturina y surfactina. Pero también existe evidencia de que éstos no serían los únicos mecanismos presentes. Se pueden definir dos estrategias para explotar la actividad antifúngica de B. amyloliquefaciens. La primera es cultivar la cepa en condiciones que favorezcan la producción de compuestos antifúngicos, para purificarlos y formularlos como un agroquímico convencional. La segunda, es obtener cultivos con altos títulos de bacterias y producir formulaciones para aplicarlas como inoculantes. En cualquiera de los dos casos es importante obtener cultivos con una alta concentración de bacterias. En nuestro laboratorio habíamos desarrollado un medio de cultivo, GELPP, de bajo costo, para el cultivo de esta cepa a escala industrial. Nuestro objetivo actual es aumentar la concentración de células, evaluar la factibilidad de un cultivo fed-batch y verificar que las células obtenidas mantengan su capacidad biocontroladora. El medio GELPP permite un crecimiento con una alta velocidad específica de B. amyloliquefaciens BNM122, además las células esporulan correctamente, una condición importante para formular un inoculante. Sin embargo el título final no es satisfactorio, aproximadamente 0.8x108 m ufc/ml (1.2 g/l de peso seco). El primer paso de este proceso de mejora fue ensayar un amplio rango de concentraciones y diluciones del medio GELPP. Observamos una relación lineal entre biomasa y concentración del medio en un rango relativamente amplio y pudimos determinar un nuevo óptimo de concentraciones de nutrientes, este medio se denominó GELPP-2 en el que la concentración de bacterias llega hasta 1.2x108 cfu/ml con un peso seco de 2.3 g/l. El paso siguiente fue la realización de una serie de pruebas con sistema de cultivo en lote alimentado (fed-batch), con el que se obtienen 2,8x108 cfu/ml y 5.2 g/l de peso seco. Un aspecto fundamental del éxito o fracaso de un producto de control biológico es su correcta formulación. Existen varios aditivos de uso común en la elaboración de inoculantes que aumentan la estabilidad de las bacterias, las protegen de los exudados de la semilla o de los cambios en presión osmótica que ocurren en la vida útil del producto. Ensayamos el efecto de varios aditivos sobre la supervivencia de las células: agua destilada (control), glicerol, PVP o medio GELPP fresco, y dos tipos de formulaciones, líquida o sólida. En todas las formulaciones líquidas el número de células aumentó durante los primeros 78 días de almacenamiento, luego continuaron dividiéndose más lentamente. En la formulación sólida preparada con un cultivo liofilizado de BNM122 y almidón de maíz no se observaron estos aumentos. En conclusión, mejoramos la densidad celular de los cultivos, probamos la inocuidad de varios aditivos y demostramos que las células así preparadas son efectivas contra F. oxysporum.