Detección de flavivirus mediante RT-PCR en tiempo real en mosquitos de Mar del Plata

DÍAZ LM; QUINTANA S; ESTÉVEZ ME ; VIDAL DOMÍNGUEZ ME; PEROTTI MA; BERON C

Buenos Aires

Congreso; I Congreso Internacional de Zoonosis y Enfermedades Emergentes y VI Congreso Argentino de Zoonosis; 2011

ASOCIACIÓN ARGENTINA DE ZOONOSIS

Entre los artrópodos hematófagos, los mosquitos son sin duda insectos vectores de gran importancia en la salud humana y animal, ya que transmiten una gran variedad de arbovirus de diversos grupos. En el mundo se han aislado aproximadamente 500 tipos diferentes de estos virus, de los cuales, hasta el momento, 24 fueron detectados en Argentina. Entre ellos, el género flavivirus comprende arbovirus de gran importancia desde el punto de vista sanitario, ya que son responsables de numerosas enfermedades humanas, entre ellas las encefalitis de San Luís y del Nilo Occidental, la Fiebre Amarilla y el Dengue. El diagnóstico etiológico de las infecciones por arbovirus requiere del aislamiento del virus, la detección de anticuerpos específicos o la determinación del genoma viral por medio de metodologías de biología molecular. Con el objetivo de poder detectar arbovirus de importancia sanitaria de una manera altamente sensible, rápida, con bajo riesgo de contaminación de las muestras y menor cantidad de falsos positivos, en este trabajo se desarrolló una metodología para la detección de flavivirus en potenciales vectores de enfermedades humanas y animales mediante el uso de la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCRq). Para ello, se realizó un muestreo de larvas y adultos de mosquitos en criaderos de Mar del Plata y alrededores, a partir de los cuales se realizó la extracción de ARN total de homogenatos de mosquitos, su digestión con desoxirribonucleasa I (ADNasa I), retrotranscripción (RT) y amplificación por PCR en tiempo real. Como control interno de la técnica se utilizó la amplificación del gen correspondiente a la subunidad ribosomal 18S de mosquitos. Este control permite evaluar la calidad de la extracción del ARN. A partir del ADN copia se realizó la determinación de flavivirus por medio de PCRq utilizando oligonucleótidos genéricos. Como resultado de este trabajo fueron detectadas muestras positivas dentro del área de estudio. La utilización de esta técnica permitió detectar en forma rápida y eficiente la presencia de flavivirus en muestras de mosquitos.