Capítulo 8: Herramientas moleculares para la detección de estirpes potencialmente tóxicas de cianobacterias

SALERNO G.L.; CONSOLO, V.F.; BERÓN, C.M.

Cianobacterias y cianotoxinas: Identificación,toxicología, monitoreo y evaluación de riesgo

Moglia S.R.L.

Lugar: Corrientes; Año: 2009; p. 151 - 157

Como se ha mencionado en el Capítulo 1, son numerosas las estirpes de cianobacterias que pueden desarrollar crecimientos extensivos, conocidos como florecimientos (“blooms”). La identificación morfológica, según se describió en el Capítulo 4, permite identificar un gran número de estas estirpes, y monitorear su presencia a través de la identificación microscópica y el recuento celular. Esta práctica puede ser implementada con bajo costo y después de un entrenamiento técnico adecuado. Sin embargo, esta metodología no permite distinguir entre cepas con potencialidad para producir toxinas de aquéllas que no lo hacen, estando bien documentado que en una floración pueden estar presentes ambos tipos de estirpes. El diagnóstico precoz de cepas tóxicas por microscopía óptica ha sido muy difícil por el hecho de que no hay una correlación entre rasgos fisiológicos y características morfológicas (tamaño y forma celular) con la producción de toxinas. Los métodos de detección molecular ofrecen una alternativa de suma utilidad para la identificación precoz de poblaciones productoras de toxinas presentes en ambientes naturales y ofrecen la ventaja que pueden detectar estirpes que están en muy baja concentración. Por otra parte, estos análisis se pueden hacer directamente con muestras ambientales y no requieren el aislamiento y cultivo de las cepas. Además de ser rápidos y simples, su costo está ampliamente compensado por su alto grado de sensibilidad y especificidad, lo que permite también hacer ensayos de grandes cantidades de muestras. Dentro de estos métodos de detección, están siendo ampliamente utilizados aquéllos basados en la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), que está basado en la detección de fragmentos de ácidos nucleicos relacionados con la síntesis de toxinas. Una vez que se ajustó esta metodología con cepas aisladas, se adaptó a muestras ambientales, por lo que puede ser aplicada directamente a las muestras de agua. Estas herramientas moleculares han demostrado ser altamente sensibles para detectar linajes de cianobacterias productoras de toxinas, principalmente, microcistinas, pero también cepas que sintetizan nodularinas y cilindrospermopsinas. Estos resultados han dado lugar al desarrollo de “kits” para ser utilizados para detectar precozmente las floraciones tóxicas y cuantificar la producción de toxinas. En este capítulo se hará una breve revisión de los métodos moleculares empleados a nivel mundial en la caracterización e identificación de cianobacterias tóxicas presentes en ambientes naturales, sus alcances y limitaciones. Para la implementación de estos métodos en los laboratorios de monitoreo, se va a publicar un manual específico, que acompañará el dictado de cursos de capacitación y entrenamiento. Si bien las técnicas moleculares empleadas son sencillas, altamente reproducibles y muy específicas, es conveniente que el personal que las utilice por primera vez reciba capacitación previa. Este entrenamiento es importante, por un lado, para evitar gastos innecesarios en la puesta a punto de las metodologías y por otro, para utilizar criterios similares en los distintos laboratorios que realizan identificación y caracterización de cianobacterias tóxicas. En este capítulo, se pretende entonces, dar un panorama de las respuestas que pueden brindar las nuevas metodologías y los lugares de referencia en el país a donde acudir para consultas y entrenamientos. La Red CianoSur tiene previsto la continuación de la formación y capacitación de recursos humanos, como así también la preparación de un Manual con los protocolos experimentales de los ensayos moleculares.