Desarrollo de una nueva metodología de criopreservación de células de melanoma para su aplicación a la vacuna CSF470

TAPIA I; ARRIAGA JM; ARIS M; DUZELMAN V; MAZZOBRE F; BUERA M; VEGA J; MORDOH J; BARRIO MM

Mar del Plata

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2011

Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas (SAIC)

La vacuna terapéutica CSF470 es una mezcla de líneas celulares de melanoma irradiadas letalmente, administradas con BCG y GM-CSF, que se está ensayando en pacientes con melanoma (Ensayo Clínico Fase II/III). El objetivo final del proyecto consiste en desarrollar una metodología para preservar CSF470 liofilizada, evitando almacenarla en N2 líq y conservando sus propiedades biológicas e inmunogénicas. La liofilización de células eucarióticas nucleadas es un área poco explorada. Para ello, las células deben congelarse en ausencia de dimetilsulfóxido (DMSO), crioprotector actualmente utilizado, siendo este el paso crítico. Ensayamos distintas condiciones de congelación utilizando criopreservantes aptos como excipientes en el producto final. Investigamos la trehalosa (TRE) como crioprotector de las células componentes de la vacuna, antes y después de su irradiación. Para la incorporación de TRE investigamos la cinética de endocitosis de fase fluída por medio del trazador fluorescente LYCH. Ensayamos distintas composiciones del medio de congelación con TRE y albúmina humana (HSA). Muestras criopreservadas en DMSO y TRE se compararon evaluando la integridad celular (exclusión azul tripán), persistencia de Ags (MART-1, gp100, GD2, GD3 y HLA-A0201, FACS), capacidad proliferativa (MTT y ensayo clonogénico) y en el caso de células irradiadas, la proporción de células apoptóticas/necróticas (Anexina-V/IP). La incorporación de TRE se calculó por el método de antrona-sulfúrico. Las células congeladas en presencia de TRE 0.2M y 30mg/ml HSA a -800C alcanzan una concentración intracelular entre 100-170 mM, luego de 5 h de endocitosis de fase fluida. La integridad celular, capacidad de crecimiento y persistencia de Ags fueron comparables para células congeladas en TRE y DMSO. Además, el patrón de apoptosis/necrosis resultó similar en ambos casos después de la irradiación. Utilizando el medio de congelación desarrollado podríamos iniciar los ensayos de liofilización de la vacuna