IDEHU 05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
CD166: un ligando de galectina-8 que media la actividad pro-angiogénica de la lectina en células BAEC
Autor/es:
L. NUGNES; V. CÁRDENAS DELGADO; M. FERNÁNDEZ; C. MARTINEZ ; M. TRONCOSO; C. WOLFENSTEIN-TODEL; D. CROCI; G. RABINOVICH; E. MALCHIODI; M. ELOLA
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología Clínica; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Inmunología Clínica
Resumen:
La galectina-8 (Gal-8) se
caracteriza por poseer secuencias de aminoácidos consenso y dos dominios de
reconocimiento a carbohidratos B-galactósidos. Demostramos previamente que
Gal-8 está implicada en procesos fisiológicos como tubulogénesis y migración de
células endoteliales. Son nuestros objetivos: 1) Identificar ligandos para
Gal-8 en células endoteliales BAEC mediante cromatografía de afinidad y
espectrometría de masa;2) Validar la interacción de Gal-8 y sus ligandos
mediante inmunoprecipitación y Resonancia Plasmática de Superficie (SPR); 3)
Estudiar los efectos de los glicanos en la interacción Gal-8/CD166 y 4) Evaluar
a CD166 como probable mediador de los efectos de Gal-8. Para ello, a partir de
lisados de BAEC y mediante cromatografía en AffiGel-Gal-8, digestión in gel y
espectrometría de masa, se demostró que CD166 (ALCAM) interactúa con Gal-8.
Mediante co-inmunoprecipitación, se detectó la formación de complejos
CD166-Gal-8. Mediante SPR, se determinó la constante de disociación aparente
(KD) de 2 uM, indicando la especificidad de la unión Gal-8-CD166. Mediante SPR
también se analizó la dependencia de glicanos en la interacción Gal-8/CD166:
Gal-8 o Gal-8 pre-incubada con sacarosa rindieron afinidad similar a CD166
inmovilizado mediante análisis de afinidad en estado estacionario (1,9 uM
y 1,1 x 1uM, respectivamente). Las KDs
aparentes obtenidas por análisis cinético fueron de 2,1uM y 0,58 uM,
respectivamente. Por lo contrario, la lactosa y el TDG, azúcares específicos
para esta lectina, inhibieron completamente la unión de Gal-8 a CD166. En
cuanto al rol fisiológico de CD166, BAEC pre-incubadas con anti-CD166 mostraron
una disminución significativa (~1,5 veces, P<0,05) de la tubulogénesis
inducida por Gal-8. Asimismo, anti-CD166 bloqueó la actividad migratoria
inducida por Gal-8 (~8 veces, P<0,05). En conclusión, CD166 es un ligando de
Gal-8 en BAEC que media al menos parte de la respuesta angiogénica inducida por
la lectina.
