Desarrollo de un inmunoensayo para la detección de anticuerpos anti-SARS-CoV-2 utilizando como único antígeno la proteína Spike, producida en larvas de insecto

SABLJIC, ADRIANA V; MARFÍA, JUAN IGNACIO; MIRANDA, MA. VICTORIA; BOMBICINO, SILVINA S.; SMITH, IGNACIO; VALDEZ, SILVINA N.; TRABUCCHI, ALDANA; IACONO, RUBÉN F.

Buenos Aires

Jornada; Jornadas Internacionales COVID-19 en Medicina Interna del Hospital de Clínicas de Buenos Aires; 2021

Hospital de Clínicas José de San Martín

Objetivos: La aparición de un nuevo coronavirus, SARS-CoV-2 en diciembre de 2019 ha tenido un serio impacto en salud y se ha expandido rápidamente por el mundo generando una pandemia. La situación requirió del rápido trabajo de diferentes áreas de investigación para encontrar vacunas, terapias y test diagnósticos. En ese sentido, el objetivo del trabajo fue desarrollar un test serológico de ELISA para la detección de anticuerpos totales (IgM, IgG e IgA) anti-SARS-CoV-2 utilizando la proteína Spike como único antígeno producida en el sistema baculovirus-larvas de insecto.Materiales y Métodos: Los baculovirus recombinantes se obtuvieron utilizando el sistema de expresión de baculovirus Bac to Bac®. La proteína S recombinante de SARS-CoV-2, en su forma trimérica, se expresó en Rachiplusia nu y se purificó mediante cromatografía de afinidad.Se utilizaron muestras de suero/plasma de 169 casos de COVID-19 confirmados por RT-PCR en tiempo real en muestras del tracto respiratorio que fueron cedidas por el Biobanco de Enfermedades Infecciosas (BBEI) del Instituto de Investigación Biomédica en Retrovirus y Sida (INBIRS). Ciento veintiocho de estas muestras fueron IgG positivas y 41 IgG negativas para SARS-CoV-2 por la prueba COVID-AR IgG ELISA (Lab. Lemos S.R.L., Argentina). El diseño del ELISA se basó en el modelo de doble paratope en el cual los anticuerpos, presentes en los sueros de los pacientes, interaccionan tanto con la proteína inmovilizada en la placa multiwell como con la proteína soluble marcada con biotina. Luego de la incubación con Estreptavidina-Peroxidasa, los inmunocomplejos formados se revelaron con H2O2/TMB, y se leyó la D.O. en un espectrofotómetro. Los resultados se expresaron como SDs (Score de Desvío Estándar), considerando como positivas las muestras con SDs > 5.Resultados: De las 128 muestras provenientes de pacientes COVID-19 + con serología positiva, 123 fueron detectadas como positivas por el método desarrollado (Sensibilidad = 96,1%). Cabe destacar que de las 41 muestras de pacientes con serología negativa, 3 (7,3%) pudieron ser detectados como positivas por el ensayo aquí descripto. La especificidad del método fue del 98,8%, calculada como 100 menos el porcentaje de individuos controles normales detectados como positivos (1/81). El análisis estadístico de curvas ROC, y el área bajo la curva obtenido (0,888) demuestran que el método presenta una alta precisión para distinguir entre muestras de pacientes y controles normales.Conclusiones: Se logró desarrollar un inmunoensayo altamente sensible y específico para la detección y semicuantificacion ?in vitro? de anticuerpos específicos totales contra SARS-CoV-2 en suero o plasma humano, constituyendo una herramienta útil para el seguimiento de la respuesta humoral tanto en individuos que han cursado la infección natural como en aquellos vacunados. Este inmunoensayo permite la detección de anticuerpos de todas las especies de animales, por lo cual es posible emplearlo en el seguimiento del proceso productivo de sueros equinos hiperinmunes empleados para tratamiento de COVID-19 y en aquellos modelos animales en los que se estén evaluando nuevas vacunas.Finalmente, el ELISA desarrollado tiene como ventajas su bajo costo, facilidad de uso y que la producción de la proteína Spike es altamente redituable ya que a partir de 1 gramo de larva se puede generar proteína para 80-100 determinaciones.