Chagasina como un antígeno inmunoprotector contra la infección por Trypanosoma cruz

RAMIREZ CV, CAZORLA SI, MALCHIODI EL

Congreso; XXIV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina deProtozoología; 2010

Chagasina (Chg) es un inhibidor de proteasas descubierto recientemente en T. cruzi como regulador fisiológico de cruzipaína (Cz), la principal cistein proteasa y factor de virulencia del parásito. Chg se asocia a Cz durante su tráfico a compartimentos del parásito y hay evidencias que su rol principal sería la regulación post-transcripcional de proteasas del parásito. En este trabajo nos propusimos evaluar la capacidad inmunoprotectiva de Chg recombinante como vacuna profiláctica o terapéutica. Para ello, a partir de ADN genómico de epimastigotes (cepa RA) se amplificó la secuencia por PCR con primers específicos codificando los sitios de corte para las enzimas de restricción BamH I y Hind III y la secuencia para seis histidinas. La secuencia obtenida digerida y ligada en forma orientada al plásmido pET23a+, mostró un 99% de identidad con las previamente reportadas. Con esta construcción se transformaron células E. coli BL21, las cuales se cultivaron en medio LB a 37ºC hasta DO600 igual a 0.7. La expresión de la proteína se indujo con el agregado de 1 mM de IPTG durante 4 h y se purificó posteriormente por cromatografía de afinidad usando resinas Ni-NTA en condiciones nativas con un rendimiento de 4.2 mg/ml.  En ensayos de Western Blot revelados con un Ac monoclonal anti-His se puso de manifiesto la identidad de Chg recombinante. Además, por inmunización de ratones con adyuvante de Freund+proteína se obtuvo sueros específicos anti-Chg. En los ensayos de inmunoprotección se inmunizaron y reestimularon a los 15 días ratones Balb/c con: GI- PBS+ODN-CpG, y GII- Chg+ODN-CpG. Quince días posteriores a la última dosis se analizó la respuesta humoral y celular desencadenada por  ensayos de DTH y titulación de Ag; observándose en el GII respuestas significativas respecto al grupo control (p<0.01). A los 30 días los ratones fueron desafiados con tripomastigotes sanguíneos. Además, para ensayar la capacidad inmuoterapéutica de la proteína, ratones infectados (GIII) recibieron dos dosis de Chg+ODN-CpG a los días 0 y 7 postinfección. Observamos una importante disminución de la parasitemia tanto en el GII  (0.7±0.6x106, p<0.01) como en el GIII (0.8±0.6x106, p<0.05), respecto al GI (1.9±0.5x106) durante la fase aguda de la infección.  Estos resultados indicarían que la inmunización o el tratamiento con Chg recombinante son capaces de controlar la infección aguda y abren la puerta a su incorporación como Ag en el diseño de una vacuna multicomponente contra T. cruzi.