Estudio de parámetros de interacción primaria (concentración y afinidad) de anticuerpos anti-proinsulina mediante tecnología de resonancia plasmática de superficie

TRABUCCHI, ALDANA; GUERRA, LUCIANO L.; IACONO, RUBEN F.; POSKUS, EDGARDO; VALDEZ, SILVINA N.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; XVII Congreso Argentino de Diabetes; 2010

Sociedad Argentina de Diabetes

Sociedad Argentina de DiabetesSistema de envío de resúmenesXVII Congreso Argentino de Diabetes - Mar del Plata 21 - 23 de octubre de 2010  Hoy es Viernes 25 de Junio, 2010. La fecha de cierre de entrega de resúmenes es Viernes 25 de Junio, 2010. Usted tiene 2 resumen/es cargados en el sistema. Estudio de parámetros de interacción primaria (concentración y afinidad) de anticuerpos anti-proinsulina mediante Tecnología de Resonancia Plasmática de Superficie. A. Trabucchi[*] [1];L. Guerra[1];R. Iacono[1];E. Poskus[1];S. Valdez[1];Cátedra de Inmunología, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA e IDEHU, CONICET-UBA[1]; La Diabetes Mellitus (DM) tipo 1A se asocia con la exposición temprana a proinsulina (PI) en el contexto de HLADR4 y los autoanticuerpos anti-Insulina (IAA) de alta afinidad reactivos contra PI (PAA) identificarían a los sujetos con mayor riesgo de desarrollar la enfermedad. Por ello, es necesario determinar concentraciones (q) y afinidades (Ka) de los IAA/PAA en el pródromo de la DM tipo 1A, con el objeto de mejorar el valor predictivo de ese marcador en grupos de riesgo. La medida convencional de Ka y q mediante radioinmunoanálisis (RIA) requiere de un trazador radiactivo y procesamiento de Scatchard para calcular los parámetros de interacción primaria. Actualmente la tecnología de Resonancia Plasmática de Superficie (RPS), en la cual se basan los biosensores facilita, el análisis cinético en tiempo real de interacciones antígeno-anticuerpo y la ponderación de Ka y q. El objetivo de este trabajo fue aplicar RPS en la medición de Ka y q de los PAA en pacientes con DM tipo 1 y en adultos con DM autoinmune.Metodología: La detección en tiempo real de la interacción PI-PAA y su análisis cinético, se realizaron utilizando el biosensor BIAcoreT100. Para ello, se inmovilizaron PI humana y la proteína humana recombinante tiorredoxina-PI (TrxPI) en una matriz de dextrán, sobre la cual interactuaron los PAA presentes en las muestras. Se estudió como modelo un suero policlonal de conejo anti-PI (SC) para la determinación de Ka y q en la evolución de la respuesta inmune. A su vez se evaluaron 18 muestras de pacientes infanto-juveniles y 2 adultos IAA/PAA+ por RIA. A continuación se resumen los resultados de q y Ka obtenidos Muestra        q (10-8M) Ka PI (108M-1) Ka TrxPI (108M-1) SC (sangría 1)     142,9               0,67               0,39 SC (sangría 2)    202,9                0,65                0,35 SC (sangría final) 264,4              0,82                0,72 DM tipo 1A       6,2±2,1              4,4±2,7          2,2±1,5 DM del adulto    9,0±7,2            9,7±8,3            1,2±8,2 Conclusiones: La utilización del biosensor permitió evidenciar la evolución de la respuesta inmune humoral específica en el suero de conejo inmunizado, observándose el progresivo incremento en los valores de q y Ka. El rango de valores de Ka y q obtenidos en las muestras de pacientes con DM fueron similares a las descriptas por otros autores empleando radiometría. Asimismo, se confirmó que la quimera de fusión TrxPI desarrollada en nuestro laboratorio resultó un antígeno alternativo apropiado.El biosensor demostró ser un instrumento útil para el cálculo de los parámetros de interacción primaria de los IAA/PAA, como alternativa al RIA, con las ventajas de su elevada versatilidad y reproducibilidad.