Respuesta oxidativa a la Terapia Fotodinámica basada en ácido 5-aminolevúlico en células leucémicas murinas

DIEZ B; TEIJO MJ; ERNST G; CORDO RUSSO R; HAJOS S; BATTLE A; FUKUDA H

Buenos Aires, Argentina

Jornada; XXVI Jornadas de oncología del Instituto de Oncología Angel Roffo- UBA.; 2010

La Terapia Fotodinámica basada en ácido 5-aminolevúlico (TFD-ALA) es útil para erradicar células malignas mediante la fotoactivación de protoporfirina IX (PpIX), un fotosensibilizante muy eficiente, sintetizado a partir del precursor ALA.  Se propone como un método de purgado para el transplante autólogo de médula ósea en pacientes con leucemia. Investigamos la respuesta oxidativa inducida por TFD-ALA en líneas celulares de leucemia murina: LBR- (sensible a drogas antineoplásicas), LBR-D160 (resistente a doxorubicina) y LBR-V160 (resistente a vincristina). En estudios previos observamos un incremento en la producción de anión superóxido y en la despolarización de la membrana mitocondrial en función del tiempo de irradiación, pero no se detectó producción de peróxido de hidrógeno. Teniendo en cuenta estos resultados, se estudió el efecto de los secuestrantes de ROS: ascorbato (ASC), manitol, glutation reducido (GSH) y triptofano (Trp), sobre la respuesta a la TFD. Se incubaron las células 1 h con los secuestrantes, luego se agregó ALA 1 mM y se continuó la incubación 4 hs. Se irradiaron con un banco de 2 tubos de luces fluorescentes durante 5 o 10 min y 1 h después se evaluó la supervivencia celular por el método del MTT. Los resultados se expresan como la media ± su error estándar calculados como el promedio de tres experimentos independientes realizados por duplicado. A las concentraciones estudiadas, ninguno de los compuestos fue fotoactivo en ausencia de ALA. Trp y manitol no protegieron a las células; ASC protegió a las tres líneas celulares, en las dos concentraciones utilizadas: 0,5 y 1 mM. El efecto fue mayor en las líneas resistentes cuando se irradiaron durante 10 min (% Supervivencia, LBR-: sólo TFD: 43,2 ± 9,3, ASC 0,5 mM: 78,6 ± 5,5, ASC 1 mM: 75,8 ± 4,4; LBR-D160: sólo TFD: 49,2 ± 2,1, ASC 0,5 mM: 88,7 ± 11,2, ASC 1 mM: 100 ± 0; LBR-V160, sólo TFD: 40 ± 5,8, ASC 0,5 mM: 86,7 ± 4,5, ASC 1 mM: 100 ± 0). El GSH también mostró un efecto citoprotector en las tres líneas, utilizado en concentraciones 10 y 20 mM; el efecto protector se evidenció en la concentración 10 mM y fue similar en las tres líneas (% Supervivencia, LBR-: sólo TFD: 61,7 ± 5,4, GSH 10 mM: 97,6 ± 2,4, GSH 20 mM: 73,1 ± 2,7; LBR-D160: sólo TFD: 39,2 ± 4,9, GSH 10 mM: 100 ± 0, GSH 20 mM: 81,5 ± 3,2; LBR-V160: sólo TFD: 53,1 ± 3,5, GSH 10 mM: 93,5 ± 3,6, GSH 20 mM: 54,7 ± 2,1 ). Para estudiar en forma comparativa el efecto de los compuestos secuestrantes se determinó el grado de protección (GP) como la supervivencia post-TFD en presencia del compuesto relativa a la supervivencia en ausencia del mismo. El mayor valor de GP se obtuvo para el GSH (GP= 2,7 a 10 mM, irradiación 10 min, en la línea LBR-D160). Los resultados obtenidos contribuyen a dilucidar los mecanismos de acción de la TFD, demostrando la importancia de las ROS en el proceso de muerte celular, y evaluar las condiciones a tener en cuenta para optimizar la eficacia de la TFD.