IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Mecanismos de muerte inducidos por la terapia fotodinámica basada en ALA en células de leucemia murina
Autor/es:
DIEZ B; TEIJO MJ; ERNST G; CORDO RUSSO R; HAJOS S; BATTLE A; FUKUDA H
Lugar:
Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; LV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010
Resumen:
La Terapia Fotodinámica (TFD) es una terapia anticancerígena en la que se aplica un fotosensibilizante (FS) y luego se irradia con luz, generando especies reactivas de oxígeno (ROS) citotóxicas que desencadenan la muerte celular. Es un método de purgado para el transplante autólogo de médula ósea en pacientes con leucemia. El ácido 5-aminolevúlico (ALA) induce la formación de protoporfirina IX, un FS muy eficiente. Investigamos la respuesta oxidativa inducida por ALA-TFD en líneas celulares de leucemia murina: LBR- (sensible a drogas antineoplásicas), LBR-D160 (resistente a doxorubicina) y LBR-V160 (resistente a vincristina). En estudios previos observamos un incremento en la producción de anión superóxido y en la despolarización de la membrana mitocondrial en función del tiempo de irradiación, pero no se detectó producción de peróxido de hidrógeno. Teniendo en cuenta estos resultados, se estudió el efecto de los secuestrantes de ROS: ascorbato, manitol, GSH y triptofano, sobre la respuesta a la TFD. Se incubaron las células 1 h con los secuestrantes, luego se agregó ALA 1 mM y se continuó la incubación 4 hs. Se irradiaron con un banco de 2 tubos de luces fluorescentes durante 5 o 10 min y 1 h después se evaluó la supervivencia celular por el método del MTT. Los resultados se expresan como la media ± su error estándar calculados como el promedio de tres experimentos independientes realizados por duplicado. A las concentraciones estudiadas, ninguno de los compuestos fue fotoactivo en ausencia de ALA. Triptofano y manitol no protegieron a las células. El ascorbato (ASC) protegió a las tres líneas celulares, en las dos concentraciones utilizadas: 0,5 y 1 mM. El efecto fue mayor en las líneas resistentes cuando se irradiaron durante 10 min (% Supervivencia, LBR-: sólo TFD: 43,2 ± 9,3, ASC 0,5 mM: 78,6 ± 5,5, ASC 1 mM: 75,8 ± 4,4; LBR-D160: sólo TFD: 49,2 ± 2,1, ASC 0,5 mM: 88,7 ± 11,2, ASC 1 mM: 100 ± 0; LBR-V160, sólo TFD: 40 ± 5,8, ASC 0,5 mM: 86,7 ± 4,5, ASC 1 mM: 100 ± 0). El GSH también mostró un efecto citoprotector en las tres líneas, utilizado en concentraciones 10 y 20 mM. El mayor efecto se evidenció en la concentración 10 mM y fue similar en las tres líneas (% Supervivencia, LBR-: sólo TFD: 61,7 ± 5,4, GSH 10 mM: 97,6 ± 2,4, GSH 20 mM: 73,1 ± 2,7; LBR-D160: sólo TFD: 39,2 ± 4,9, GSH 10 mM: 100 ± 0, GSH 20 mM: 81,5 ± 3,2; LBR-V160: sólo TFD: 53,1 ± 3,5, GSH 10 mM: 93,5 ± 3,6, GSH 20 mM: 54,7 ± 2,1 ). Para estudiar en forma comparativa el efecto de los compuestos secuestrantes se determinó el grado de protección (GP) como la supervivencia post-TFD en presencia del compuesto relativa a la supervivencia en ausencia del mismo. El mayor valor de GP se obtuvo para el GSH (GP= 2,7 a 10 mM, irradiación 10 min, en la línea LBR-D160). Los resultados obtenidos contribuyen a dilucidar los mecanismos de acción de la TFD, demostrando la importancia de las ROS en el proceso de muerte celular, y evaluar las condiciones a tener en cuenta para optimizar la eficacia de la TFD.