Inmunoensayo basado en Citometría de Flujo para la detección simultánea de Diabetes Mellitus Autoinmune y Enfermedad Celíaca.

MASCI, IVANA; FACCINETTI, NATALIA I.; VALDEZ, SILVINA N.; SABLIJC, ADRIANA V; MARFÍA, JUAN IGNACIO; TRABUCCHI, ALDANA; BOMBICINO, SILVINA S.; PASCUAL, LUCRECIA; IACONO, RUBÉN F.

Buenos Aires

Congreso; 73° Congreso Argentino de Bioquímica; 2019

Asocioación Bioquímica Argentina

La Diabetes Mellitus Autoinmune y la Enfermedad Celíaca (EC) son enfermedades crónicas, poligénicas y multifactoriales vinculadas con una disfunción del sistema inmune. Es frecuente que se presenten en simultaneidad en un mismo paciente, por lo cual se recomienda el screening de rutina para la EC en pacientes con reciente diagnóstico de Diabetes Mellitus tipo 1 (DM1). La detección simultánea de los marcadores de autoinmunidad de DM1 y EC sería un apareamiento racional e interesante para mejorar el diagnóstico de estas patologías relacionadas.El objetivo del trabajo fue desarrollar y optimizar un inmunoensayo basado en citometría de flujo (CF) que permita la detección simultánea y discriminativa de 2 marcadores de DM1 (GADA e IA-2A) y uno de EC (tTgA). Se ensayaron 35 sueros humanos normales y 21 muestras de pacientes con DM1. Para la CF se empleó un modelo de doble paratope incubando los sueros con una mezcla de microesferas de diferente fluorescencia interna, cada una adsorbida con un autoantígeno recombinante: TrxGAD, TrxIA-2 o H6tTg, y una mezcla de dichos autoantígenos marcados con biotina. Los inmunocomplejos formados se detectaron empleando estreptavidina-ficoeritrina y se adquirió en un citómetro de flujo. Los resultados fueron expresados en Standard Deviation scores (SDs), considerando positivas las muestras con SDs > 2,5.Mediante el ensayo de CF, FloCMIA multiplex, se detectó un 76,2% de pacientes con GADA (sensibilidad analítica: 88,24% y especificidad: 85,71%), un 52,38% con IA-2A (sensibilidad analítica: 56,25% y especificidad: 85,71%) y tTgA en el 42,86% de los sueros (sensibilidad analítica: 50% y especificidad: 80,0%). Estos resultados fueron contrastados con el ensayo de unión de radioligando (RBA) para DM1, detectando GADA en un 80,95% e IA-2A en un 76,19% de los sueros con un 100% de especificidad, y con el kit comercial de ELISA para EC detectando tTgA en un 38,1% con una especificidad del 97,1%.En forma preliminar, se logró desarrollar un ensayo que permitió discriminar los autoanticuerpos GADA, IA-2A y/o tTgA, en colecciones de sueros de pacientes con DM1 y/o EC. El novedoso inmunoensayo simplifica el screening de la población a gran escala para la detección de DM1 y EC. Asimismo, posibilita la detección diferencial de múltiples marcadores en un único acto analítico con un pequeño volumen de muestra -reduciendo costos y tiempo operativo-, no emplea radiactividad y permite detectar todos los isotipos de inmunoglobulinas.