Estudio de los mecanismos fisiopatogénicos asociados a la patolog¨ªa ¨®sea en enfermedad de Gaucher.

MUCCI J M; SUQUELI GARCIA M F; DE FRANCESCO P N; SCIAN R; FOSSATI C A; DELPINO M V; ROZENFELD P A

Mar del Plata Argentina

Congreso; Reunión Conjunta SAIC-SAFIS-SAFE 2010.; 2010

La enfermedad de Gaucher (EG) es una patolog¨ªa gen¨¦tica de almacenamiento lisosomal, causada por la deficiencia de la enzima lisosomal beta-glucosidasa (GBA). Las manifestaciones ¨®seas incluyen fracturas, dolor, osteopenia y osteonecrosis, y son, por lo general, refractarias al tratamiento. En la EG se ha descripto un aumento de marcadores fenot¨ªpicos de resorci¨®n ¨®sea mediada por osteoclastos tales como Catepsina K y TRAP. Por otro lado, se sabe que la inflamaci¨®n es un factor clave en la patog¨¦nesis de la EG. El objetivo de este trabajo es investigar si existe inducci¨®n de osteoclastog¨¦nesis en dos modelos in vitro de la EG, uno murino utilizando macr¨®fagos de la l¨ªnea celular J774 (M) y uno humano mediante empleo de c¨¦lulas mononucleares de sangre perif¨¦rica de individuos normales (H). Las c¨¦lulas M y H se cultivaron en presencia de Conduritol ¦Â-ep¨®xido (CBE), un inhibidor de la GBA, con el agregado de diferentes concentraciones de LPS y se midi¨® la producci¨®n de IL-1¦Â, TNF-¦Á e IL-6 en los sobrenadantes de cultivo mediante ELISA. Se observ¨® un aumento de la secreci¨®n de citoquinas en los cultivos H que conten¨ªan CBE y LPS con respecto a los que se trataron con LPS solo. En cambio, no se detect¨® diferencias apreciables para los cultivos M. Los sobrenadantes de los cultivos H y M se utilizaron para tratar cultivos de monocitos humanos de la l¨ªnea THP-1 y cultivos de precursores de m¨¦dula ¨®sea en presencia de M-CSF, respectivamente. Se midi¨® la inducci¨®n de osteoclastog¨¦nesis mediante la determinaci¨®n de TRAP y MMP-9, y la expresi¨®n de los genes RANK, CTSK y CCL2 mediante qPCR. Se observ¨® un aumento en la inducci¨®n de osteoclastog¨¦nesis para las c¨¦lulas tratadas con sobrenadantes de c¨¦lulas estimuladas con CBE con respecto a los controles y un aumento aun mayor cuando se trataron con aquellos que proven¨ªan de c¨¦lulas estimuladas con CBE y LPS, en ambos modelos. Como conclusi¨®n, ambos modelos in Vitro de Enfermedad de Gaucher exhibieron un aumento en la inducci¨®n de osteoclastog¨¦nesis. El modelo humano, a diferencia del murino, mostr¨® una respuesta inflamatoria m¨¢s acentuada.