La gencitabina induce autofagia mediada por VMP1 y promueve la muerte apoptotica de c¨¦lulas de cancer de p¨¢ncreas

PARDO R; LO RE A; MOLEJO M; ROPOLO A; PAPADEMETRIO D; GONZALEZ C; ALVAREZ E; IOVANNA J; VACCARO M

Mar del Plata Argentina

Congreso; Reuni¨®n Anual SAI -SAIC; 2009

SAIC

La autofagia es un proceso de degradaci¨®n de componentes citoplasm¨¢ticos. En c¨¢ncer, la autofagia puede jugar un rol citoprotectivo o puede llevar a la muerte celular. Poco se conoce acerca del rol de la autofagia en el c¨¢ncer pancre¨¢tico. Nuestro objetivo consisti¨® en analizar la participaci¨®n de la autofagia en la muerte de c¨¦lulas de c¨¢ncer pancre¨¢tico inducida por gemcitabina, la droga est¨¢ndar para el tratamiento del c¨¢ncer de p¨¢ncreas. En este estudio demostramos que la gemcitabina induce autofagia en las l¨ªneas tumorales pancre¨¢ticas PANC-1 y MIAPaCa-2. Este resultado fue evidenciado por la acumulaci¨®n de organelas ac¨ªdicas, el aumento (p<0,05) del reclutamiento de LC3 (microtubule-associated protein-1 light-chain-3) y la presencia de ultraestructura de autofagia luego de 8h de tratamiento con gemcitabina 200 ¦ÌM. Este agente quimioterap¨¦utico tambi¨¦n indujo la muerte celular por apoptosis, detectada por morfolog¨ªa, aumento (p<0,05) del porcentaje de c¨¦lulas anexina V positivas y clivado de caspasa 3 luego de 24h. Sorprendentemente, el tratamiento con 3-Metiladenina (3-MA), un inhibidor de la autofagia, disminuy¨® significativamente la apoptosis. En estudios previos se determin¨® que la prote¨ªna VMP1 (Vacuole Membrane Protein 1) induce la autofagia en c¨¦lulas de mam¨ªferos. Con el objeto de determinar si la expresi¨®n de VMP1 esta involucrada en el mecanismo por el cual la gemcitabina induce autofagia, se realizaron ensayos de Real Time PCR. Los resultados mostraron que el tratamiento con gemcitabina induce la expresi¨®n de VMP1 en las c¨¦lulas PANC-1 y MIAPaCa-2. La inhibici¨®n de la autofagia mediante el silenciamiento de VMP1, por un shRNA espec¨ªfico, disminuy¨® (p<0,05) la apoptosis. M¨¢s aun, la sobreexpresi¨®n de VMP1 en las c¨¦lulas tumorales condujo a la muerte por apoptosis. Por lo tanto se demuestra que la v¨ªa de autofagia mediada por VMP1 promueve la apoptosis en las c¨¦lulas de c¨¢ncer de p¨¢ncreas y media la citotoxicidad inducida por la gemcitabina.