Inhibidores de MAPK y NF-KB inducen muerte autofágica y apoptótica en una línea tumoral pancreática.

PAPADEMETRIO DANIELA; SIMUNOVICH T, CAVALIERE V; LOMBARDO T.,; CAVALIERE V.,; COSTANTINO S.; ALVAREZ E

Mar del Plata Argentina

Congreso; Reunión conjunta Anual de la SAIC y SAI.; 2009

SAI y SAIC

Las terapias antineoplásicas actuales frente a los tumores de páncreas están dirigidas a inhibir el crecimiento celular pero no logran inducir muerte. Varios tumores ponen en juego a la autofagia como mecanismo de resistencia frente a estímulos pro-apoptóticos. Nos proponemos evaluar si la línea celular PANC-1, que utiliza como mecanismo de resistencia a la autofagia, muere frente a la exacerbación de este mecanismo por UO126, inhibidor de MEK1/2, y CAPE, inhibidor de NF-κB, y analizar si estas drogas logran inducir apoptosis post-inhibición de la autofagia. La capacidad de estas drogas de inducir muerte celular se determinó por anexina V-FITC/IP. El tratamiento con UO 10µM indujo valores de células anexina+ del (33,2±4,1)% y CAPE 180µM, del (26,6±3,2)%, luego de 4 días. Se realizaron ensayos similares pretratando a las células con 10mM de 3-MA (3-metil-adenina) inhibidor de la autofagia, obteniéndose valores similares. Del análisis morfológico por tinción con FDA/IP se observó que la muerte inducida por los inhibidores era compatible con un fenotipo autofágico, mientras que las células pretatadas con 3-MA, morían por apoptosis. Esto se corroboró por WB, mediante el análisis de los clivajes de LC3 y PARP, a fin de evaluar actividad de la vía autofágica y apoptótica, respectivamente. Además, se analizó la relación Beclin-1/BCL-XL con el mismo fin. Se observó que las células PANC-1 en estado basal clivan LC3 y PARP y que UO126 y CAPE aumentan el clivaje de LC3, mientras que estas drogas sobre las células pretratadas con 3-MA, aumentan el clivaje de PARP. Beclin-1/BCL-XL es mayor en las células tratadas con los inhibidores solos respecto a las células a la que se les inhibió previamente la autofagia (4,22 vs 3,19 para UO y 9,33 vs 7,21 para CAPE). Concluimos que UO126 y CAPE, inducen muerte de las células PANC-1 exacerbando el mecanismo autofágico. Sin embargo, cuando la autofagia es inhibida, las drogas logran direccionar el mecanismo de muerte hacia la apoptosis