Detección de autoanticuerpos anti-proinsulina mediante citometría de flujo para el diagnóstico de diabetes mellitus autoinmune.

GUERRA, LUCIANO L.; TRABUCCHI, ALDANA; FACCINETTI, NATALIA I.; MARFÍA, JUAN IGNACIO; VALDEZ, SILVINA N.; SABLJIC, ADRIANA V; PENAS, ALBERTO; POSKUS, EDGARDO

Mar del Plata

Congreso; XXI Congreso Argentino de Diabetes; 2018

Sociedad Argentina de Diabetes (SAD)

Introducción: Los autoanticuerpos anti-proinsulina (PAA) son los primeros que aparecen durante el desarrollo de diabetes mellitus (DM) tipo 1, por lo que su detección será muy útil para el diagnóstico precoz de la patología. El método radiométrico de referencia (RBA) para su detección es de alta sensibilidad y especificidad, pero presenta alto costo, es altamente contaminante y requiere de personal capacitado y centros con habilitación necesaria. Objetivo: Desarrollar y optimizar un inmunoensayo para la detección de PAA basado en Citometría de Flujo (CF), empleando microesferas adsorbidas con proinsulina (PI) recombinante.Materiales y métodos: Se emplearon 36 sueros de individuos controles normales y 24 muestras de pacientes infanto juveniles con DM tipo 1, PAA positivos por RBA. Para la CF se empleó un modelo de doble paratope en el cual se incubaron durante 4 días, los sueros con microesferas de poliestireno de 5 µm adsorbidas con PI expresada en E. coli como proteína de fusión con Tiorredoxina (TrxPI), y TrxPI-biotina. Los inmunocomplejos formados fueron reportados con estreptavidina-Ficoeritrina. La detección por CF se realizó a λexcitación= 488 nm. Se analizó la media geométrica (GeoM) de las señales obtenidas y los resultados fueron expresados en Standard Deviation scores: SDs= (GeoMsuero analizado-GeoMmedia controles normales)/Desvío Estándarcontroles normales. Resultados: La mediana de los resultados obtenidos con los sueros de individuos controles normales resultó significativamente diferente a la de los sueros de pacientes con DM tipo 1 (p=0,0068). Con el fin de seleccionar el cut off con la máxima sensibilidad y especificidad, se realizaron curvas trazando dichos parámetros frente a los valores de cut off correspondientes, seleccionándose SDs>3,0 como umbral de positividad. Así, la especificidad del método fue de 86,1%. De los 24 sueros de pacientes con DM evaluados, 14 fueron positivos por CF, con señales que oscilaron entre 1,113 y 30,294 SDs y mediana de 3,880 siendo la sensibilidad obtenida del 58,3%. Asimismo, se analizó el área bajo la curva ROC que fue del 0.7054, indicando que el método presenta una performance aceptable.Conclusiones: Se logró desarrollar un inmunoensayo por CF para la detección de PAA con buena sensibilidad y menor complejidad e impacto ambiental que el RBA. Los resultados obtenidos factibilizan el desarrollo de inmunoensayos para la detección simultánea y discriminativa de los principales marcadores de autoinmunidad en DM, empleando microesferas de distinto tamaño o fluorescencia interna adsorbidas con los diferentes autoantígenos, las cuales son fácilmente discriminables en el citómetro de flujo.