Desarrollo de un novedoso inmunoensayo basado en citometría de flujo para la Detección Simultánea de Diabetes Mellitus Autoinmune y Enfermedad Celíaca

BOMBICINO, SS; FACCINETTI, NI; POSKUS, E; GUERRA, LL; TRABUCCHI, A; SABLJIC, AV; MARFÍA, JI; VALDEZ, SN

Mar del Plata

Congreso; XXI Congreso de la Sociedad Argentina de Diabetes; 2018

Sociedad Argentina de Diabetes

Introducción.La Diabetes Mellitus Autoinmune (DMA) y la Enfermedad Celíaca (EC) son enfermedades crónicas, poligénicas y multifactoriales vinculadas con una disfunción del sistema inmune.Se presentan en simultaneidad en un 10% de los pacientes, por lo cual se recomienda el screening de rutina para la EC en pacientes con reciente diagnóstico de Diabetes Mellitus tipo 1. Objetivo.Desarrollar y optimizar un novedoso inmunoensayo basado en citometría de flujo (FloCMIA multiplex) que permita la detección simultánea y discriminativa, en un único acto analítico, de los principales marcadores de autoinmunidad involucrados en DMA (IA-2A y GADA) y EC (tTgA). Materiales y Métodos.Se emplearon 36 sueros humanos normales y 27 muestras de pacientes con DM tipo 1.Para el FloCMIA multiplexse empleó un modelo de doble paratope incubando los sueros con una mezcla de microesferas de poliestireno de 4 um y diferente fluorescencia interna, cada una adsorbida con un autoantígeno recombinante: Glutamato decarboxilasa (TrxGAD), Tirosina fosfatasa IA-2 (TrxIA-2) o Transglutaminasa tisular (His6tTg), y una mezcla de dichos autoantígenos marcados con biotina. Luego de la incubación, los inmunocomplejos formados sedetectaron empleando estreptavidina conjugada con Ficoeritrina (λ excitación= 488 nm) y se adquirió en un citómetro de flujo. Las poblaciones de microesferas fueron discriminadas de acuerdo con la intensidad de emisión de su fluorescencia interna. Los resultados fueron expresados en Standard Deviation scores (SDs), considerando positivas las muestras con valores de SDs > 3,0. Resultados. Inmunoensayo FloCMIA multiplex GADA IA-2A tTgARango(SDs)(-1.463)-127,92(-1,318)-36,85(-2,287)-107,55Sensibilidad (%)a59,3 40,7 44,4Especificidad (%)b86,1 86,1 77,8a. % de pacientes positivos para cada marcador del total de pacientes estudiados b. 100% menos el porcentaje de falsos positivos Conclusiones.En forma preliminar, se logró desarrollar un ensayo multiplex que permitió discriminar los autoanticuerpos GADA, IA-2A y/o tTgA en un único acto analítico, en colecciones de sueros de pacientes con DMA y/o EC. Esto representa una ventaja operativa respecto a realizar cada determinación en forma individual, reduciendo costos, tiempo y con menor impacto ambiental.