Desarrollo de una nueva técnica para la detección de anticuerpos anti-receptor de acetilcolina en pacientes con Miastenia Gravis.

PAZ ML; VILLA A; AGUIRRE F; BARRANTES FJ; JUSTO ME; LEONI J

Mar del Plata

Congreso; Congreso Argentino de Neurología; 2018

Sociedad Neurológica Argentina

La Miastenia Gravis (MG) es una enfermedad autoinmune mediada por autoanticuerpos patogénicos (ACRA) dirigidos contra el receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR), entre otros. El radioinmunoensayo (RIA), método costoso y perjudicial para el medioambiente, es el ensayo de referencia para detectar ACRA. Nuestro objetivo es desarrollar una nueva metodología para la medición de ACRA mediante citometría de flujo, utilizando micropartículas de poliestireno, nAChR y sondas fluorescentes.Se compararon dos fuentes de nAChR purificado: músculo bovino (Mb) y órgano eléctrico de Torpedo califórnica (Tc). Se caracterizaron diferentes sueros de referencia: 5 de voluntarios sanos (SHN), 5 de pacientes con MG ACRA+ (A-E) y 5 de pacientes con MG ACRA- (F -J). La nueva técnica inmunoanalítica se basó en recubrir la superficie de micropartículas de 4 μm con nAChR purificado de Mb o Tc (70μg/100cm2). La eficacia del recubrimiento se verificó mediante microscopía de fluorescencia. Posteriormente se realizó una citometría de flujo para medir la IFM (Intensidad de Fluorescencia Media) de 1x105 micropartículas recubiertas incubadas con: 1 μM de α-BTX-AlexaFluor488 (BTX) o SHN, sueros de MG (1:100) y anticuerpos secundarios marcados con FITC (1:200).Las imágenes de microscopía de fluorescencia mostraron que las micropartículas se recubrieron efectivamente con nAChR, ya que el receptor puede ser reconocido por α-BTX, una neurotoxina altamente específica para el nAChR. Por citometría de flujo los resultados fueron, para Mb, IFM: autofluorescencia vs BTX (p