La reprogramación metabólica de las células de LLC permite su supervivencia en hipoxia y modifica la potencia de drogas citotóxica según el estadío de la enfermedad

BLANCO G.; LOMBARDO T; DURÁN T; KORNBLIHTT L; GIL FOLGAR, M

Congreso; XXIII Congreso Argentino de Hematología, Sociedad Argentina de Hematología; 2017

Introducción Las células de LLC (cLLC) son capaces de recircular a través desangre periférica, ganglios linfáticos y médula ósea. Las regionespseudofoliculares de los ganglios y la médula ósea donde se alojan sonespecialmente hipóxicas en comparación con la sangre periférica. Recientementese demostró que las cLLC circulantes podrían tolerar la hipoxia mediante laadaptación metabólica. En estas condiciones, podrían modificar su sensibilidada drogas citotóxicas debido a la activación de respuestas de estrés celular (comola mitofagia, la biogénesis mitocondrial y actividad del proteasoma). Objetivo Estudiamos en 2 pac. con LLC en diferente estadío: bajo riesgoRai(0)/ Binet A (BR-A) y riesgo intermedio Rai (I,II)/Binet B (RI-B) latolerancia a la hipoxia y la potencia citotóxica de fármacos dirigidos aapoptosis mitocondrial (trióxido de arsénico, ATO), sistemaubiquitina-proteasoma (MG132), autofagia y mitofagia (vincristina, VCR) ybiogénesis mitocondrial (VPA), en forma individual y combinada.Metodología Se obtuvieron cLLC de sangre periférica por centrifugación engradiente de ficol, en pac. con LLC y linfocitosis (> 80% célulasCD23+CD5+CD19+) y se incubaron con ATO, VPA, VCR, y MG132 en forma individual ocombinada por 72h. Para la exposición a hipoxia (O2 < 1%) seutilizó una cámara MIC-101 (95% N y 5% CO2). Se evaluó la viabilidad porcitometría de flujo con FDA y PI. Se calculó la cc. con efecto medio citotóxico(EC50) de los fármacos individuales y combinados y el índice de combinación(CI) por el método Chou-Talalay (CI <1 =sinergismo, CI=1 aditividad. CI>1antagonismo). Resultados Tanto las cLLC BR-A como las de RI-B tuvieron una viabilidad >90% después de 72h en hipoxia. En las cLLC de RI-B la combinación ATO+VPA fuesinérgica en normoxia (CI=0.701) pero antagónica en hipoxia (CI=1.589). Lacombinación ATO+VPA+VCR fue sinérgica en normoxia (CI=0.90) pero parcialmenteantagónica en hipoxia (CI=1.432). Sin embargo, se incrementó la potenciaindividual de las cuatro drogas bajo hipoxia en comparación con normoxia (ATO2.14 uM / 1.38 uM ; VPA 5.14 mM/1.73 mM ; VCR 0.25 uM/0.19 uM ; MG132 7.12uM/0.54 uM; EC50 normoxia/hipoxia, respectivamente). La combinación VPA+VCR fuemuy sinérgica tanto en normoxia como en hipoxia a niveles altos de efecto(CI=0.593 y CI=0.647 normoxia vs hipoxia para EC75). Luego del estudio, elpaciente RI-B fue tratado con clorambucil y rituximab (6 ciclos), observándose unarespuesta hematológica completa, pero sin modificación del tamaño de lasadenomegalias luego de 8 meses de seguimiento.En pac. BR-A, lainteracción en normoxia de ATO+VPA fue antagónica (CI=1.389), ATO+VPA+VCR fue aditiva(CI=1.017), mientras que VPA+VCR, VCR+ATO y ATO+VPA+VCR+MG132 fueron sinérgicas(CI= 0.741, 0.695, y 0.62, respectivamente). Bajo hipoxia, la interacciónATO+VPA cambió a aditiva (CI=1.076) mientras que las otras combinaciones fueronsinérgicas igual que en normoxia (CI <1 en todos los casos). Bajo hipoxia,disminuyó la potencia individual de VPA (1.64 mM /1.95 mM), aumentaron las deATO (3.60 uM /1.84 uM) y VCR (10.07 uM /4.59 uM) (EC50 en normoxia/hipoxiarespectivamente), mientras que MG132 no presentó cambios (0.64 uM /0.59 uM, normoxia/hipoxia).Conclusiones Las cLLC pueden tolerar la hipoxia severa por reprogramaciónmetabólica incluso en el caso de bajo riesgo. Además, las cLLC de pacientes conriesgo intermedio Rai (I, II) enfermedad activa y con persistencia deadenomegalias por falta de respuesta al tratamiento con drogas alquilantes,pueden mostrar una respuesta diferente a combinaciones de fármacos citotóxicoscuando están bajo condiciones hipóxicas. Esto podría ser un factor que expliquela respuesta hematológica completa sin remisión del compromiso ganglionar observadaen RI-B. La inhibición farmacológica de las respuestas de estrés celular y dela reprogramación metabólica podría contribuir a reducir la resistencia altratamiento con progresión de enfermedad en LLC.