Utilidad del ELISA de avidez para evaluar la respuesta inmune conferida por planes de inmunización empleando diferentes formulaciones y adyuvantes frente a la Enfermedad Respiratoria Bovina

ALMOZNI B; CANELLADA A; DÍAZ A ; MANGONE F ; SOTELLO A; CASTRO M

CABA

Congreso; Congreso Internacional de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2017

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

Las condiciones a las que está expuesto el ganado bovino son adversas conduciendo a la inmunosupresión de los animales y predisponiéndolos a contraer enfermedades. La Enfermedad Respiratoria Bovina (ERB), de etiología polimicrobiana, genera distres en las vías respiratorias desencadenado severos brotes de neumonía que pueden culminar en la muerte de los animales. Si bien en el campo se emplean vacunas comerciales, éstas no siempre proveen un control adecuado de la enfermedad, y a su vez, la respuesta inmune protectiva no está del todo comprendida y los ensayos inmunodiagnósticos no están definidos. Por tanto, el objetivo de este trabajo fue emplear un ELISA de avidez para comparar la respuesta inmune conferida por la vacunación contra ERB en el ganado bovino frente a los agentes bacterianos causantes de la enfermedad: Pasteurella multocida (PM) y Mannheimia haemolytica (MH) empleando distintas formulaciones vacunales. Para cumplir este objetivo, el primer objetivo parcial fue desarrollar la puesta a punto de la técnica en nuestro laboratorio empleando sueros provenientes de nuestro modelo murino de vacunación.Se llevaron a cabo planes de inmunización en ratones y en dos rodeos bovinos empleando una vacuna comercial y vacunas experimentales. Distintos lotes de ratones recibieron 3 dosis (días 0, 15 y 27) de la vacuna comercial BiopoligenHS (compuesta por antígenos virales y las bacterias PM, MH e HS), o vacunas experimentales con PM ó MH y distintos adyuvantes (hidróxido de aluminio (HA), Adyuvante de Freund Incompleto (AFI) y el adyuvante polimérico Montanide Gel01 (Monta)) y se sangraron a t0, t10, t27 y t37. Los sueros se diluyeron 1/1000 para el ELISA de avidez y se incubaron con urea 6M. En bovinos se hicieron dos planes de inmunización en terneros recién destetados: en el 1er plan, los animales recibieron 3 dosis: t0, t21 y t42de la vacuna comercial o una vacuna experimental del sobrenadante de cultivo de PM y HA y fueron sangradas los días 0, 21, 42 y 60. En el 2do plan, los bovinos recibieron 2 dosis: t0 y t21 de la vacuna comercial y vacunas experimentales con Monta como adyuvante y PM o MH como inmunógenos. Se sangraron los días 0, 21 y 42. En ambos planes hubo una vaca control que solo recibió adyuvante. Se evaluaron los títulos de IgG específica para PM y MH empleando un ELISA indirecto, y para el ensayo de avidez se adaptó el ELISAs empleando urea 6M como agente disociante calculando el índice de avidez (IA) como la relación entre la (DO sin urea/DO con urea) x DOsin urea. En el modelo murino, las vacunas experimentales con HA y AFI generaron niveles de anticuerpos similares a la vacuna comercial, mientras que la vacuna con Monta generó títulos de IgG mas altos para ambas bacterias (ANOVA). Los ELISAS de avidez no mostraron diferencias significativas entre vacunas. Con respecto al modelo murino se observaron mayores títulos de IgGs para la vacuna experimental con Monta respecto a las compuestas con HA , AFI y a la comercial (para PM y MH, p< 0,05, ANOVA), no se observaron diferencias en los IA. Por otro lado con respecto al modelo bovino, en el 1er plan se observaron diferencias entre los títulos de IgG entre la vacuna comercial y el sobrenadante PM (p