Diseño de transportadores dirigidos para la encapsulación de ftalocianinas como potenciales agentes para el tratamiento fotodinámico especifico de tumores.

GAUNA, G; AWRUCH, J; LEONI, J; GONZÁLEZ MAGLIO, D

San Miguel de Tucumán

Congreso; III GRAFOB; 2016

La terapia fotodinámica combina laadministración tópica o intravenosa de un fotosensibilizador que se localizapreferentemente en el tumor, seguido por una irradiación con una luz delongitud de onda apropiada lo que resulta en la producción de oxigeno singleteu otra especie de oxigeno reactivo que puede conducir a la destrucción deltumor [1]. Combinarla selectividad de anticuerpos monoclonales con las propiedades citotóxicas delfotosensibilizador es una estrategia interesante para aumentar la concentracióndel fotosensibilizador en el tumor [2].Nos propusimos encapsularftalocianinas de zinc (II) y conjugar los liposomas con anticuerpos monoclonaleshumanizados anti-CD20.Las ftalocianinas se prepararon porciclotetramerización de los ftalonitrilos convenientemente sustituidos concadenas alquílicas portadoras de azufre.  Esquema 1 Esquema 1Los liposomas se prepararonsiguiendo la técnica del film lipídico empleándose dipalmitoilfosfatidil colina(DPPC) y diestearoilfosfatidil etanolamina polietilenglicol (DSPE-PEG) disueltos en cloroformodestilado. En esta etapa también se incluye la ftalocianina (Pc9) debido a suscaracterísticas lipofílicas.Para la modificación del anticuerpose incubó la muestra de Rituximab con 2-iminotiolano y una vez preparado sehizo reaccionar con los liposomas previamente elaborados.Investigamos la morfología de losliposomas en Acetato de Uranilo al 0.5% en solución acuosa mediante microscopiade transmisión de electrones (TEM) observándose distintas formas de losliposomas dependiendo la incorporación de ftalocianina oftalocianina-anticuerpo. La eficiencia delfotosensibilizador dentro del sistema liposoma-Pc9-anticuerpo la evaluamosmidiendo la generación de oxigeno singlete. La presencia de un alto scatering en el sistema dispersa la luzen gran medida. Los espectros de absorción del sistema liposoma-Pc9 mostraronun comportamiento distinto al espectro del sistema liposoma-Pc9-anticuerpo encuanto la velocidad de decaimiento de los monitores analizados (pendiente delgráfico de absorbancia en función del tiempo). Observamos que para el sistemaliposoma-Pc9-anticuerpo el decaimiento del monitor es más significativo. Estoresulta importante teniendo en cuenta que la generación de oxigeno singlete esdebida a la presencia de ftalocianina. Para evaluar la presencia delanticuerpo unido al liposoma realizamos inmunofluorescencia detectando la unióndel anticuerpo a las células blanco utilizando un anticuerpo secundarioconjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC). Finalmente, evaluamos lafototoxicidad de la muestra en estudio, realizando un ensayo en placa. Luego deuna incubación de 24 horas para permitir la incorporación delfotosensibilizador se expuso la placa a una fuente de luz. En paralelo evaluamosla toxicidad de las moléculas en ausencia de luz. Luego de otras 24 horas deincubación a 37 °C en estufa gaseada realizamos la valoración de la viabilidadremanente en cada pocillo utilizando el colorante fluorescente Alamar blue. Losliposomas obtenidos con este método de incorporación del anticuerpo carecen decapacidad fototóxica en células en cultivo. Probablemente debido a losproblemas observados del alto scateringde las muestras durante las mediciones fotofísicas. Debemos explorar nuevos sistemas deincorporación del anticuerpo a liposomas más estables y, por lo tanto, conmejores características fotofísicas.