Vincristina y ácido valproico sensibilizan a las células de linfoma de Burkitt a la muerte por hipoxia debido a su efecto sobre las mitocondrias

CAVALIERE, V; KORNBLIHTT, L; BLANCO, GA; LOMBARDO, T

Congreso; 16° Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas; 2016

VINCRISTINAY ÁCIDO VALPROICO SENSIBILIZAN LAS CÉLULAS DE LINFOMA DE BURKITT A LA MUERTEPOR HIPOXIA POR SU EFECTO SOBRE LAS MITOCONDRIAS Kornblihtt, Laura I;Cavaliere, Victoria; Lombardo,Tomás; Blanco, GuillermoA.Objetivo/Introducción  El linfoma deBurkitt es una neoplasia muy agresiva y resistente ala mayoría de los tratamientos convencionales. Las células normales sometidas ahipoxia severa por períodos prolongados, fallecen por apoptosis intrínseca yaque la ausencia de oxígeno produce falla mitocondrial. En cambio, lasneoplasias agresivas logran eliminar las mitocondrias disfuncionantes mediantemecanismos como la mitofagia, y de esta manera evitan el inicio de laapoptosis mitocondrial o intrínseca. Las células con gran actividad de mitofagia suelen presentar mitocondrias agregadas enla zona perinuclear. La vincristina (VCR) es un potente inhibidor de la mitofagia por cuanto desorganiza la red de microtúbulos y dispersa los agregados mitocondriales perinucleares. El ácido valproico (VPA), inhibidor de histona deacetilasa, se ha sido utilizado en varios estudiosclínicos fase II como fármaco antileucémico. Recientemente también se demostró que elVPA es un potenciador de la biogénesis de nuevas mitocondrias y podríasensibilizar los blastos leucémicos a la apoptosis mitocondrial ointrínseca. Nuestroobjetivo es sensibilizar lascélulas de linfoma de Burkitt (CLB) a la muerte por hipoxia medianteel uso de VPA y la VCRMétodo Se cultivaron las células Raji (CLB)sin tratar y en presencia de VPA y VCR (dosis fija de 1uM)durante 24, 48 y 72 hs. Todos los estudios se realizaronen condiciones de hipoxia severa (O2<0.1%) mediante una cámara MIC-101 con95% nitrógeno y 5% CO2. El porcentaje de células muertas se evaluó por tincióncon ioduro de propidio y fluoresceína diacetato mediante un citómetro de flujo.El potencial de membrana y la masa mitocondrial se evaluaron por tinción contetrametilrodamina (TMRE) y nonyl-naranja-acridina (NAO) respectivamente,analizándose todo por citometría de flujo. La presencia de agregadosperinucleares mitocondriales se observó por microscopía de fluorescenciacon mitotracker red.Resultados La viabilidadde CLB basales expuestas a la hipoxia severa durante 48hs fue superior al 78%,pero sólo de 3 % a las 72hs.   Enpresencia de VPA la sobrevida a las 72 hs se alargó en forma dosis dependiente(16% con VPA 2mM, 57% con VPA 4mM y 63% con VPA 6mM) paralelamente al aumentode la masa mitocondrial en forma dosis dependiente a las 24, 48 y 72hs,confirmando el efecto del VPA como inductor de la biogénesis de nuevasmitocondrias.                                                                                                                                                         En cambio, VCR  suprimió la tolerancia a la hipoxia no sólode las CLB basales sino también de las tratadas con VPA, observándose unadisminución de la sobrevida a 48 y 72hs. Además se constató un bloqueo de laeliminación de mitocondrias y un aumento de la masa mitocondrial. Pero con elagregado de VCR a las CBL detectamos 2 cambios importantes: las mitocondriaspresentaron una gran caída del potencial de membrana y desaparecieron porcompleto los agregados mitocondriales perinucleares presentes en las CLB basales y en lastratadas con distintas concentraciones de VPA.  Conclusiones En hipoxiasevera, las CLB sobreviven bien hasta las 48hs y mejoran sustancialmente esatolerancia en presencia de VPA probablemente por un aumento del recambio demitocondrias. En cambio,VCR inhibe la tolerancia de las CLB tanto basal como la inducida por VPA albloquear la eliminación de mitocondrias en falla (con alto grado de despolarización)que desencadenarían la apoptosis intrínseca.