Aplicación del autoantígeno IA-2 recombinante en inmunoensayos para el diagnóstico de Diabetes Mellitus Autoinmune.

SABLJIC, A. V.; ROVITTO, B. D.; IACONO, R. F.; FACCINETTI, N. I.; POSKUS, E.; GUERRA, L. L.; TRABUCCHI, A.; VALDEZ, S.N.

Ciudad Autonoma de Buenos Aires

Congreso; VI Jornadas de Jóvenes Investigadores, Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA; 2016

Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA

La proteína tirosina fosfatasa 2 asociada a insulinoma (IA-2) es uno de los principales autoantígenos vinculados a Diabetes Mellitus (DM) Autoinmune. Los autoanticuerpos anti-IA-2 (IA-2A) constituyen un marcador del proceso autoinmune que precede a la sintomatología clínica y sirve de apoyo diagnóstico a las formas de DM con componente autoinmune. El objetivo del trabajo fue desarrollar inmunoensayos no radiométricos para la detección de IA-2A, empleando IA-2 recombinante humana expresada en E. coli. La región intracelular de IA-2 fue expresada como proteína de fusión con Tiorredoxina (TrxIA-2ic) en la cepa GI724 y purificada por cromatografía de afinidad a partir de la fracción intracelular soluble. Empleando dicha proteína se desarrollaron dos diseños de ELISA: Modelo indirecto, inmovilizando TrxIA-2ic-biotina a través de avidina, con posterior agregado del suero de los pacientes y detección colorimétrica del inmunocomplejo; y un modelo doble paratope, basado en la doble interacción del anticuerpo, presente en los sueros de pacientes, tanto con TrxIA-2ic inmovilizado en la placa como con TrxIA-2ic-biotina soluble y posterior revelado con avidina-peroxidasa. Las muestras de pacientes diabéticos tipo 1 (n=48) fueron analizadas en paralelo por el método de referencia radiométrico (RBA). La purificación proteica dio un rendimiento de 10 mg TrxIA-2ic/L cultivo con una pureza 77%. El diseño de ELISA indirecto alcanzó una sensibilidad relativa a la del RBA del 40,5% y una especificidad del 95,7%, con scores de desvío estándar (SDs) que fueron desde -2,76 a 4,85, y una mediana de 1,05. El diseño de doble paratope presentó una sensibilidad relativa del 59,5% y una especificidad del 94,9% con un rango en SDs de -0,71-111,20 y una mediana de 1,05. Asimismo, ambos diseños detectaron 4 pacientes positivos que fueron negativos por el método de referencia. En conclusión, se logró expresar eficientemente Trx-IA-2ic en E. coli y desarrollar métodos de bajo costo, no radiométricos y ambientalmente inocuos para la evaluación de IA-2A, accesibles para muchos laboratorios.