Desarrollo de elisa para evaluar anticuerpos específicos contra bacterias causantes de neumonía en sueros bovinos

MARTIRENA R2; CASTRO M1; DÍAZ A; MEJÍA M3; ALMOZNI B1; MANGHI M1

La esperanza

Congreso; X Reunión Argentina de Patologías Veterinarias; 2016

Asociación Argentina de Patología Veterinaria

Dentro de las enfermedades que afectan a los bovinos desde el nacimiento hasta los 2 años de edad, se encuentra el Complejo Respiratorio Bovino (CRB). El CRB es una entidad de causas múltiples que ocasiona grandes pérdidas especialmente en los sistemas intensivos de cría y engorde de bovinos, y en la cría bovina. Las pérdidas económicas que causa deben atribuirse a la muerte de animales debido al desarrollo de un cuadro neumónico, a los gastos para los tratamientos y al personal profesional involucrado. Los principales factores de riesgo para esta patología son los factores climáticos y/o de manejo de los animales como el destete precoz, el transporte, el hacinamiento que inducen el distrés del ganado y que en conjunto afectan enormemente a su sistema inmune. Entre los agentes causales de la enfermedad respiratoria podemos encontrar agentes virales y bacterianos, siendo Pasteurella multocida (PM), Mannheimia haemolytica (MH) e Histophilus somni (HS) las bacterias frecuentemente aisladas en las neumonías del bovino.El objetivo del presente trabajo es realizar un screening de la respuesta inmune humoral generada por la vacunación contra neumonía en rodeos bovinos de la provincia de Buenos Aires, comparándolo con un rodeo afectado por neumonía. Para evaluar Acs específicos contra las bacterias se desarrolló previamente en nuestro laboratorio un ELISA indirecto puesto a punto con sueros de ratones inmunizados con vacunas comerciales y experimentales. En este trabajo se evaluó la producción de anticuerpos (Acs) de isotipos IgM, IgGt, IgG1 e IgG2 específicos para PM, MH e HS por medio del ELISA en sueros de bovinos jóvenes provenientes de campos de Tandil (n=9) y de Coronel Suarez (n=39), vacunados contra CRB. Por otro lado y para evaluar si la respuesta de Acs específicos perduraba en el tiempo, se analizaron sueros de vacas de un tambo de Gonzalez Chávez (n=70) 4 meses después de recibir su vacunación anual. Brevemente, las placas de ELISA fueron sensibilizadas a 4ºC durante toda la noche con las bacterias muertas por calor y bloqueadas con PBS-BSA1% por 1h a 37ºC. Los sueros fueron diluidos 1/100 e incubados 2h a 37ºC, los Acs conjugados a peroxidasa anti-IgM (Cappel), anti-IgGt (KPL), anti-IgG1 o anti-IgG2 (Bethyl) fueron incubados por 1h a 37ºC. El sustrato cromogénico empleado fue H2O2-TMB, y la reacción fue frenada con ácido sulfúrico 4N. Luego de cada paso se realizaron los lavados correspondientes con PBS-Tween 0,05% y se midieron las DO450-540 en un espectrofotómetro. En los sueros de los bovinos vacunados los resultados obtenidos fueron similares para las 3 bacterias evaluadas, determinando valores de DO450-540 muy bajos para IgG1 ( PM: 0,083± 0,033; MH: 0,068± 0,017, HS: 0,075± 0,022) e IgG2( PM: 0,091± 0,045; MH: 0,090± 0,017, HS: 0,057± 0,046), bajos también para IgGt ( PM : 0,402± 0,283) mientras que los valores de DO para IgM fueron más elevados (PM: 0,863 ± 0,248; MH: 1,097± 0,223, HS: 1,120± 0,260) . Por otro lado, los sueros de los bovinos con el brote de Neumonía mostraron valores de IgM e IgGt superiores que los sueros de bovinos vacunados (t Test,IgM p< 0,0001; IgGt p