Detección y caracterización de autoanticuerpos anti-ZnT8 (ZnT8A) en pacientes argentinos con Diabetes Mellitus Tipo 1

FACCINETTI NI, ROVITTO BD, GUERRA LL, IACONO RF, TRIFONE L, POSKUS E, TRABUCCHI A, VALDEZ SN

Buenos Aires

Congreso; XIX Congreso de la Sociedad Argentina de Endocrinología y Metabolismo; 2015

Sociedad Argentina de Endocrinología y Metabolismo

Detección y caracterización de autoanticuerpos anti-ZnT8 (ZnT8A) en pacientes argentinos con Diabetes Mellitus tipo 1.Introducción y objetivosEn el año 2007, fue descripto un nuevo autoantígeno involucrado en Diabetes Mellitus (DM): la isoforma 8 del transportador de Zn (ZnT8). Los autoanticuerpos anti-ZnT8 (ZnT8A) son específicos de célula beta y constituyen un marcador de autoinmunidad adicional a los autoanticuerpos anti-Insulina/Proinsulina (IAA/PAA), anti-Glutamato Decarboxilasa (GADA) y anti-Tirosina Fosfatasa IA-2 (IA-2A). El principal epitope de ZnT8 involucrado en el reconocimiento de los autoanticuerpos se localiza en el dominio C-terminal de la molécula (aa 268-369). En esta región existen dos variantes polimórficas en el residuo 325 (Arg/Trp), razón que llevó a algunos autores a analizar la asociación entre la reactividad de los ZnT8A y el polimorfismo SLC30A8. Sin embargo, aún no se encuentra suficientemente definido el papel de este residuo en la inmunorreactividad de este marcador.En este contexto, el objetivo del presente trabajo involucró la detección y caracterización inmunoquímica de los ZnT8A provenientes de pacientes argentinos infanto-juveniles con reciente diagnóstico de DM tipo 1. Para ello se emplearon diferentes variantes antigénicas recombinantes de ZnT8, ya sea con Arg o Trp en la posición 325, o bien construcciones quiméricas que contienen ambos aminoácidos en dicha posición. El objetivo final fue establecer si el residuo 325 del ZnT8 es un determinante clave para definir la inmunorreactividad de los ZnT8A y obtener información acerca del papel de los dímeros en la génesis de estos autoanticuerpos.Materiales y métodosSe evaluaron 100 sueros de pacientes argentinos con reciente diagnóstico de DM tipo 1 (44 mujeres y 56 hombres, edad media 10 años- rango de 1 a 17 años-). La determinación de ZnT8A se realizó mediante las técnicas radiométricas de referencia (Ensayo de Unión de Radioligando -RBA-), utilizando distintas variantes antigénicas: ZnT8-Arg325, ZnT8-Trp325, ZnT8-Arg-Trp325, ZnT8-Arg-Arg325 y ZnT8-Trp-Trp325. Paralelamente se determinó la presencia de los otros marcadores de autoinmunidad para DM por RBA.ResultadosDe los 100 pacientes estudiados, 65 fueron ZnT8A+ para al menos alguna de las variantes antigénicas empleadas. Ocho reconocieron todas las formas recombinantes de ZnT8. La mayoría (56) resultaron positivos para el heterodímero (ZnT8-Arg-Trp325), 25 de los cuales reconocieron además el homodímero ZnT8-Arg-Arg325 y el monómero ZnT8-Arg325. Nueve pacientes presentaron únicamente ZnT8A como marcador de autoinmunidad. Por otro lado, los niveles de señales obtenidos con el heterodímero fueron significativamente mayores a los niveles alcanzados empleando cualquiera de las otras variantes antigénicas (mediana 17.99 vs. 10.71, 6.32, 5.66 y 4.44 SDscore para ZnT8-Arg325, ZnT8-Trp325, ZnT8-Arg-Arg325 y ZnT8-Trp-Trp325, respectivamente; p < 0.05, test t de Mann-Whitney).ConclusionesSe logró abordar la caracterización inmunoquímica de los ZnT8A presentes en pacientes argentinos con DM tipo 1 empleando diferentes variantes antigénicas de ZnT8. Se observó que la incorporación de ZnT8A, en combinación con los marcadores clásicos, incrementa la sensibilidad diagnóstica de autoinmunidad. La reactividad exclusiva de ZnT8A por las variantes antigénicas que contienen Arginina en el residuo 325 evidencia la existencia de epitopes dependientes del aminoácido presente en dicho residuo. Además, la aplicación de variantes diméricas reveló la existencia de epitopes definidos por la estructura cuaternaria de ZnT8. La construcción heterodimérica fue la que mostró la mejor combinación de sensibilidad y especificidad a los fines del screening rutinario de ZnT8A.