IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización del fenotipo apoptótico inducido por inhibidores de
Autor/es:
CAVALIERE VICTORIA; PAPADEMETRIO DANIELA; LOMBARDO TOMAS; COSTANTINO SUSANA; HAJOS SILVIA; BLANCO GUILLERMO; ALVAREZ ELIDA
Lugar:
La Falda Cordoba
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Científica de la Soc. Arg. de Inmunología; 2008
Institución organizadora:
SAI y Grupo Rioplatense de Citometria de Flujo
Resumen:
  El factor de transcripción NF-B regula el balance muerte/sobrevida celular. Su inhibición puede inducir apoptosis y alteraciones en la proliferación celular. La célula apoptótica se caracteriza por presentar alteraciones morfológicas evidentes en el citoplasma y el núcleo y, cambios bioquímicos como: modificaciones en la distribución de fosfolípidos de membrana, permeabilización de la membrana externa mitocondrial, disrupción del potencial de membrana mitocondrial (Δm) y liberación de proteínas pro-apoptóticas desde la matriz mitocondrial como Citocromo c y Smac. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar, mediante técnicas de citometría de flujo, el fenotipo apoptótico inducido por el tratamiento con dos inhibidores de NF-B, CAPE y MG-132, en una línea celular linfoblastoidea humana (PL104), así como analizar los efectos de dichos compuestos sobre el ciclo celular. El tratamiento con CAPE (50 ug/ml) por 24 hs indujo un 45.42±4.60 (p<0.001)% de células apoptóticas evaluado por expresión de Annexina V-FITC/ioduro de propidio (PI), mientras que para MG-132 (2 uM) fue del 62.16±3.29 (p<0.001)% vs 16.16±1.10% para el control sin tratar. La evaluación de apoptosis por contenido Sub-G1 de DNA evaluado por tinción con DAPI mostró valores del 23.05±4.78 % (p<0.01) para el tratamiento con CAPE (50 ug/ml) y del 23.70±0.75 %(p<0.01) para MG-132 luego de 24 hs. Solamente CAPE logró disminuir el Δm evaluado con TMRE (0.05 uM) a las 24 hs (95.24±3.55% cél despolarizadas (p<0.001)). Por Western blot, se observó un aumento en el nivel de expresión de la proteína pro-apoptótica Citocromo c a las 24 hs tanto con CAPE como con MG-132, sin registrarse cambios en el nivel de Smac. CAPE y MG-132 aumentaron el porcentaje de células en la fase G0/G1 en 1.2 y 1.1 veces respectivamente, disminuyeron 1.7 y 2.3 veces respectivamente el porcentaje de G2/M mientras que CAPE disminuyó 1.3 veces el de la fase S. Se concluye que el fenotipo apoptótico inducido por CAPE y MG-132 en células PL104 evaluado a las 24 hs, se caracterizó por la exposición de fosfatidilserina en la membrana celular, fragmentación del DNA y liberación de Citocromo c al citosol. Además, ambos compuestos indujeron una desregulación en la progresión del ciclo celular de las células PL104. Solamente CAPE logró disipar el Δm sugiriendo que, en el tratamiento con MG-132 la liberación de Citocromo c operaría por un mecanismo independiente del colapso del Δm.