Acción citotóxica versus citostática de IFN I e inhibidores de las cias NFkB y MAPK sobre celulas tumorales y normales

PAPADEMETRIO DANIELA; CAVALIERE VICTORIA; COSTANTINO SUSANA; LOMBARDO TOMAS; SIMUNOVICH TANIA; HAJOS SILVIA; BLANCO GUILLERMO; ALVAREZ ELIDA

Buenos Aires

Simposio; Simposio Avances en inmunolo{gia B{asica y Aplicada.; 2008

Academia Nacional de Farmacia y Bioqu{imica

  La mayoría de los tumores presentan resistencia tanto al ataque por el sistema inmune como a los agentes quimioterapéuticos, manifestando señales de sobrevida celular y una falla en la respuesta a señales proapoptóticas. Dentro de los mecanismos de resistencia a la muerte presentados por las células cancerosas, la sobreactivación de factores de proliferación celular como NF-kB y P-ERK, juegan un papel fundamental. Los IFN-I son agentes biológicos ampliamente utilizados como terapia para varias neoplasias como melanomas, carcinoma de células renales, tumores de cabeza y cuello y mielomas, con relativo éxito terapéutico. Los objetivos del presente trabajo fueron: - Analizar el efecto sobre la proliferación celular y la capacidad inductora de apoptosis en las línea tumoral linfoide T murina, LB02, linfoblastoidea B humana, PL104, y tumorales pancreáticas humanas, PANC-1 y MIAPaCa-2, bajo tratamiento con IFN-I e inhibidores de las vías de MAPK (UO126) y NF-kB (CAPE). - Evaluar el efecto inductor de apoptosis de las drogas en estudio sobre células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de donantes sanos. Se determinó la inhibición de la proliferación celular, mediante incorporación de 3H-T, luego del tratamiento por 48 hs con IFN y  (0 a 100000 UI/ml), UO126 (0 a 10 M) y CAPE (0 a 100 g/ml), en las líneas celulares en estudio. El tratamiento de las líneas tumorales epiteliales pancreáticas con 1000UI/ml de IFN resultó en un 45% y 54% de inhibición de la proliferación celular (p<0.001), mientras que igual dosis de IFN inhibió en un 53% y 68% (p<0.001), para PANC-1 y MIAPaCa-2 respectivamente. Similares tratamientos sobre las líneas linfoides no indujeron valores estadísticamente significativos de inhibición de la proliferación celular. UO126 (10 M) indujo una inhibición del crecimiento celular del 99%, 73%, 46% (p<0.001) y 1% (p>0.05) en las líneas MIAPaCa-2, LB02, PANC-1 y PL104, respectivamente. Ambas líneas tumorales pancreáticas y la línea LB02 expuestas a CAPE (50g/ml) mostraron un 99% de inhibición de la proliferación celular (p<0.001), mientras que para la línea PL104 se registró un 69% de inhibición (p<0.001). La inducción de la apoptosis se evaluó tanto morfológicamente por tinción con Naranja de Acridina y Bromuro de Etidio, como por la técnica de Annexin V-FITC mediante citometría de flujo a los 2, 4 y 7 días para las líneas linfoides y CMSP, PANC-1 y MIAPaCa-2 respectivamente. Los IFN-I no indujeron muerte celular por apoptosis en ninguna de las líneas celulares estudiadas. El tratamiento con UO126 (10 M) de las líneas MIAPaCa-2, PANC-1 y LB02 resultó en un 90%, 78% y 50% de apoptosis. Este inhibidor no fue capaz de inducir apoptosis en la línea PL104. El inhibidor de NF-kB (CAPE 50g/ml) fue capaz de inducir la muerte por apoptosis de las células LB02 en un 90%, 40% para PANC-1 (p<0.001), 35% para PL104 (p<0.01) y un 28% para MIAPaCa-2 (p<0.05). El tratamiento de CMSP con las drogas en estudio no mostró inducción de apoptosis significativa en ningún caso. Estos resultados permiten concluir que: - Los IFN-I en las líneas linfoides LB02 y PL104 no tienen efecto sobre la proliferación celular ni sobre la apoptosis. En cambio inhiben la proliferación en las células tumorales pancreáticas de origen epitelial; sin embargo, no inducen apoptosis, por lo que ejercen un efecto citostático. - UO126, inhibidor de MEK1/2, presenta actividad citotóxica sobre LB02, MIAPaCa-2 y PANC-1, inhibiendo la proliferación e induciendo muerte apoptótica. Contrariamente, no tiene efecto sobre la línea PL104. Esto permite deducir que la vía de las MAPK es fundamental para la sobrevida de las líneas pancreáticas y de la linfoide LB02, no así para PL104. - CAPE, inhibidor de NFkB, presenta actividad citotóxica sobre las cuatro líneas celulares en estudio, inhibiendo significativamente la proliferación celular e induciendo apoptosis. Sin embargo, la inducción de la apoptosis sobre la línea MIAPaCa-2 es menor. Por lo tanto la activación constitutiva de vía de NFkB es central en la sobrevida de las cuatro líneas celulares en estudio. - Ninguna de las drogas fue capaz de inducir apoptosis en células mononucleares obtenidas a partir de sangre periférica de donantes sanos. Esta acción selectiva de las drogas, en relación con su capacidad de disparar los eventos que conducen a la apoptosis, indicaría que este efecto está mediado por la alta tasa proliferativa de las líneas tumorales en comparación con los normales. - Las líneas linfoides resultaron más sensibles a los inhibidores de las vías de MAPK y NFkB que las pancreáticas, ya que estas últimas requirieron entre 4 y 7 días de tratamiento para obtener valores significativos de muerte por apoptosis vs 2 días para las líneas linfoides. Nuestros resultados nos indican que la identificación de blancos moleculares relacionados con puntos críticos del inicio de la vía proapoptótica, permite reconocer los mecanismos de resistencia instaurados, facilitando el desarrollo de nuevas alternativas terapéuticas. Estudios en marcha permitirán describir los mecanismos alternativos que participan en el bloqueo de la muerte de la célula tumoral.