IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización molecular del sitio de interacción del superantígeno SEG con la mutante de alta afinidad del TCR murino Vβ8.2
Autor/es:
MM FERNANDEZ; MC DE MARZI; SA CHIAPPINI; PN ROMASANTA; AB BAUER; MB GANEM; EL MALCHIODI
Lugar:
La Falda-Córdoba
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología,XI Jornada Científica del Grupo Rioplatense de citometría de Flujo; 2008
Institución organizadora:
SAI
Resumen:
Caracterización molecular del sitio de interacción del superantígeno SEG con la mutante de alta afinidad del TCR murino Vβ8.2   Fernández, MM; De Marzi, MC; Chiappini, SA; Romasanta, PN; Bauer, AB; Ganem, MB; Malchiodi, ELIDEHU-CONICET, Cátedra de Inmunología Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA   Los superantígenos bacterianos (SAgs) son toxinas que sin ser procesadas, interactúan con el CMH-II y la región Vβ del TCR produciendo una respuesta inmune exacerbada de tipo proinflamatoria que puede ser letal. Los SAgs se asocian fuertemente con el desencadenamiento de enfermedades autoinmunes en individuos susceptibles. Dos modelos murinos, uno para la encefalitis autoinmune, análoga a la esclerosis múltiple, y el otro para la artritis reumatoidea permiten estudiar la relación entre SAgs y estas enfermedades. En ambos casos, los TCRs involucrados expresan preferentemente cadenas Vβ8.2. Por otra parte, se ha propuesto el uso de dominios Vβ como neutralizantes de SAgs liberados en la infección bacteriana. Podría ser usada con estos fines la cadena L2CM, una mutante de Vβ8.2 que tiene alta afinidad por los SAgs de la familia SEB. El SAg SEG, cuya estructura tridimensional fuera recientemente determinada por nosotros, ha sido incorporado recientemente a esta familia. Resultados obtenidos en nuestro laboratorio mostraron que SEG no tiene una afinidad muy aumentada por L2CM respecto de Vβ8.2, lo que lo distinguiría del resto. Para caracterizar esta interacción se tituló el complejo L2CM-SEG por tamiz molecular, concentró a 10 mg/ml y sometió a un “screening” de cristalización. Los cristales obtenidos difractaron a 2.5 Ǻ. La resolución de la estructura tridimensional del complejo, mediante reemplazo molecular, demostró que las principales mutaciones en L2CM respecto a Vβ8.2 A52V, S54N y Q72H, no favorecían la interacción con SEG. Esto se debería a que: 1- A52V no genera un aumento en el área de contacto con SEG, como sí lo hace con los otros SAgs; 2- la mutación S54N favorece contactos con F204 de los SAgs, pero SEG ya involucra este residuo en la interacción con Vβ8.2 y 3- Q72H genera una estructura más flexible de la zona HV4, pero este área de Vβ8.2 no interacciona con SEG. Conclusiones: la maduración de la afinidad obtenida con L2CM respecto de Vβ8.2, favorece contactos intermoleculares con los SAgs en zonas que no forman parte de la interacción con SEG, porque este no conserva el sitio tradicional de unión con Vβ8.2. Este trabajo demuestra que el diseño de mutantes de alta afinidad para su uso como agentes bloqueantes o competitivos del ligando natural, requiere del conocimiento de las áreas involucradas en la interacción, por lo que la resolución de las estructuras que permitan un análisis de las interfaces de unión, es la herramienta más apropiada.