IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Efecto de las proteinas de reconocimiento de peptidoglicanos (PGRPs) en la fagocitosis de S. aureus mediada por monocitos
Autor/es:
MC DE MARZI; M TODONE; MM FERNÁNDEZ; MB GANEM; GA BLANCO; EL MALCHIODI
Lugar:
La Falda-Córdoba
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología,XI Jornada Científica del Grupo Rioplatense de citometría de Flujo; 2008
Institución organizadora:
SAI
Resumen:
Efecto de las proteínas de reconocimiento de peptidoglicanos (PGRPs) en la fagocitosis de S. aureus mediada por monocitos Las PGRPs son proteínas de reconocimiento de peptidoglicanos (PGN). Poco se sabe sobre su ubicación y los mecanismos en los que intervienen. PGRP-S de ratón actúa en la destrucción intracelular de bacterias por PMN, mientras que PGRP-L puede hidrolizar PGN. Con el fin de estudiar su rol en la respuesta innata, expresamos y purificamos PGRP-S y PGRP-Ia humanas y obtuvimos antisueros contra las mismas. Mediante inmunoprecipitación e immunoblotting, detectamos la presencia de dímeros de PGRP-S en suero y en sobrenadantes de PMN inducidos. Se postula que las PGRPs son bactericidas y actuarían como conectores uniendo PGN y un receptor no conocido. Para estudiar la presencia de esos receptores incubamos monocitos con PGRP-S y PGRP-Iα. Observamos, mediante citometría de flujo, un incremento en MFI de 1.7±0.2 y 2.1±0.2 veces para PGRP-S y -Iα, respectivamente. Por Immunoblotting y realizando ensayos de unión en presencia de glutaraldehído, observamos que PGRP-S coprecipitaba con una molécula presente en monocitos de ~10 kDa. Para estudiar si PGRP-S y PGRP-Ia tenían actividad bacteriostática o bactericida realizamos cultivos de S. aureus en presencia de las mismas y determinamos UFC/ml. Ante la posibilidad de que produjeran daño en la pared bacteriana, estudiamos mediante citometría de flujo la incorporación de Sytox-Green. Comprobamos que las PGRPs dañaban a la pared (incrementos de MFI de 3.7±0.4 y 2.3±0.1 veces para PGRP-S y -Iα, respectivamente), sin causar efectos bacteriostáticos ni bactericidas.             Con el fin de analizar el efecto de las PGRPs sobre la capacidad de S. aureus de sobrevivir en células fagocíticas, realizamos ensayos de infección/fagocitosis de S. aureus con monocitos, en presencia de las PGRPs, determinando las UFC/ml en las células lisadas. Observamos que S. aureus ingresaba 10 veces más a monocitos en presencia de PGRP-S (105 UFC/ml), que con PGRP-Iα, o en los controles sin PGRP (104 UFC/ml). Cabe destacar que a las 72 h sólo había bacterias sobrevivientes en el interior de las células control (103 UFC/ml). Podemos concluir que PGRP-S humana sería un dímero natural que es expresado en PMN como una proteína de 45 kDa, que es secretada al medio cuando el PMN degranula. Los resultados sugieren que PGRP-S reconocería un receptor en la superficie celular de los monocitos, y que la presencia de PGRP-S incrementa la captación y destrucción de S. aureus por estas células.